酸化ストレス下における細胞内ゲノム環境の可塑性と破綻

氧化应激下细胞内基因组环境的可塑性和破坏

• 批准号: 03F00342
• 负责人: 豊國 伸哉
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03F00342/
• 关键词: 酸化ストレス; DNA傷害; アクロレイン; 免疫沈降; ゲノム

哺乳類を含む高等動物は酸素をエネルギーに変換して生命活動を行っている。その変換効率は100%ではないため、ミトコンドリアなどで活性酸素が常時発生し、ゲノムに傷害を与えていると考えられる。これまで代表的なDNA修飾塩基である8-oxoguanineに関して、その量の多寡ならびに修復酵素の研究が行われてきた。本研究においては、脂質過酸化物のひとつであるアクロレインと2'-deoxyadenosineの付加体について、ゲノムのどのような部位でできるのかを解析するのを目指して、今年度の6ヶ月に間に方法の確立を図った。これまで、私たちはアクロレインと2'-deoxyadenosineの付加体に対するマウスモノクローナル抗体を共同で開発し、酸化ストレスによる発癌モデルである鉄ニトリロ三酢酸誘発ラット腎発癌モデルに置いて、この付加体が増加していることを確認した。この結果をもとに、ゲノムDNAの免疫沈降の実用化を検討した。ラット腎臓より、ゲノムDNAはよう化ナトリウム法で抽出し、制限酵素処理により平均的1000bpの断片とした。添加DNA量、抗体量、反応時間、洗浄バッファー組成、プロテインAセファロースあるいは2次抗体付加磁気ビーズ量などに関して詳細な検討を行い、最適な条件を見出した。この条件で、免疫沈降を行うと鉄ニトリロ三酢酸投与6時間の腎臓のゲノムDNAにおいて、免疫沈降されるDNA量が有意義に高いことが判明した。

Mammals contain high levels of acid, which can cause changes in life activities. The conversion rate is 100%. Active acids are always produced. The amount of 8-oxoguanine involved in DNA modification and the study of repair enzymes were investigated. This study aimed to establish a method for the analysis of lipid peracidifiers in June of this year. This is a confirmation of the development of anti-cancer antibodies against 2'-deoxyadenosine and 2'-deoxyadenosine inhibitors. The results of this study were discussed in detail. The average fragment of 1000bp was extracted by enzyme restriction method. The amount of DNA added, the amount of antibody, the reaction time, the composition of the reaction, the amount of antibody added, and the optimal conditions are discussed in detail. These conditions, immune sedimentation, iron and triacetic acid administration and 6-time renal tissue DNA, immune sedimentation, DNA content is significant, high, high,