ペプチドトランスポートソームの実体解明と発現・局在調節における生理的意義

阐明肽转运体的实体及其在表达和定位调节中的生理意义

• 批准号: 18059018
• 负责人: 乾 賢一
• 金额: $ 6.14万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18059018/
• 关键词: ペプチドトランスポータ; トランスポートソーム; 蛋白質間相互作用; 極性上皮細胞; 発現調節; 薬物動態; 細胞膜

我々はこれまで、ペプチドトランスポータPEPT1の臓器分布、輸送特性、活性調節機構、発現変動機構などについて検討を行うとともに、数理学的モデルに基づくPEPT1輸送シミュレータの開発を進めてきた。しかし、PEPT1の細胞膜局在化機構については未だ不明な点が多い。本研究ではPDZ蛋白質に着目し、PEPT1の細胞膜局在におけるPDZ蛋白質の役割について検討を加えた。PEPT1は肝臓において細胞膜ではなくライソソームにおいて機能している可能性が報告されていることから、まず培養ヒト肝がん細胞HepG2を用いて検討したところ、HepG2細胞にはPEPT1 mRNAの発現が認められたものの、細胞への取り込み活性は全く認められなかった。また、HepG2細胞にEGFP-PEPT1融合蛋白質を発現させたところ、細胞膜ではなくライソソームと考えられる細胞内への局在を示じた。PDZK1またはPDZK2を共発現させてもその局在に変化は認められなかったことから、PDZK1,PDZK2が肝臓におけるPEPT1の局在化には関与していないものと考えられた。次に培養腸上皮細胞Caco-2を用いて検討を行ったところ、Caco-2細胞にはPDZK1,PDZK2が発現していることが示された。そこで、RNA干渉法を用いてPEPT1,PDZK1,PDZK2それぞれをノックダウンしたところ、PEPT1をノックダウンした場合には輸送活性の低下が認められたのに対し、PDZK1,PDZK2をノックダウンしてもPEPT1の活性には変化が認められなかった。従って、PDZK1,PDZK2はPEPT1の局在・活性調節には関与していないことが示唆された。

The distribution of PEPT 1, transport characteristics, activity regulation mechanism, detection mechanism, and mathematical model are discussed. PEPT1 is a cell membrane organ that is not identified. In this study, PDZ protein was detected and PEPT1 was detected in the cell membrane. PEPT1 mRNA expression in HepG2 cells was detected in vitro, and the activity of PEPT1 mRNA in HepG2 cells was detected in vitro. EGFP-PEPT1 fusion protein was developed in HepG2 cells, and the intracellular protein was detected in HepG2 cells. PDZK1, PDZK2 and PEPT1 are both present in the game. The expression of PDZK1 and PDZK2 in cultured intestinal epithelial cells Caco-2 and Caco-2 was studied. In the case of PEPT1,PDZK1, PDZK 2, or PEPT1, the activity of PEPT1 is reduced. PDZK1, PDZK 2 and PEPT1 are regulated by the activity of the enzyme.

项目成果

Procainarnide and N-acetylprocainamide are superior substrates for hepatic organiccation transporter OCT1 rather than renal OCT2

普鲁卡因胺和 N-乙酰基普鲁卡因酰胺是肝脏有机阳离子转运蛋白 OCT1 而非肾脏 OCT2 的优质底物

• 发表时间: 2007
• 作者: Masahiro Shimomura;et. al.
• 通讯作者: et. al.

Identification and functional characterization of a new human kidney-specific H+/organic cation antiporter, kidney-specific multidrug and toxin extrusion 2

• DOI: 10.1681/asn.2006030205
• 发表时间: 2006-08-01
• 期刊: JOURNAL OF THE AMERICAN SOCIETY OF NEPHROLOGY
• 影响因子: 13.6
• 作者: Masuda, Satohiro;Terada, Tomohiro;Inui, Ken-ichi
• 通讯作者: Inui, Ken-ichi

Moleculaz characterisation of H^+/organic cation antiporters (MATEs)

H^/有机阳离子逆向转运蛋白 (MATE) 的分子表征

• 发表时间: 2007
• 作者: Moto Kajiwara;et. al.;Ken-ichi Inui
• 通讯作者: Ken-ichi Inui

Characterization of the basal promoter element of human organic cation transporter 2 gene

• DOI: 10.1124/jpet.106.118695
• 发表时间: 2007-05-01
• 期刊: JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND EXPERIMENTAL THERAPEUTICS
• 影响因子: 3.5
• 作者: Asaka, Jun-ichi;Terada, Tomohiro;Inui, Ken-ichi
• 通讯作者: Inui, Ken-ichi

Critical roles of Sp1 in gene expression of human and rat H+/organic cation antiporter MATE1

• DOI: 10.1152/ajprenal.00322.2007
• 发表时间: 2007-11-01
• 期刊: AMERICAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY-RENAL PHYSIOLOGY
• 影响因子: 4.2
• 作者: Kajiwara, Moto;Terada, Tomohiro;Inui, Ken-Ichi
• 通讯作者: Inui, Ken-Ichi