生殖腺凍結保存による配偶子回収に関する病理学的・免疫学的検討

性腺冷冻保存配子回收的病理学和免疫学检查

• 批准号: 04F04604
• 负责人: 村田 雄二
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04F04604/
• 关键词: 性腺凍結; 休止期; GnRH; DNAワクチン; HVJ-E; ELISA; 抗GnRH抗体; 性腺凍結保存; 人工遺伝子; 性腺抑制

我々が目標とする性腺凍結のためにまず、性腺を休止状態に導入することが有利であると考えた。そこで我々は安価にGnRHを抑制し、性腺を抑制するためのDNAワクチンを考案した。GnRHをタンデムに5回繰り返し、その間にヒンジ構造を有する人工遺伝子をプライマー伸長法を用い作成して得た、約100~180bpの2本鎖DNAをT4ライゲースで結合し、pBluescriptに組み込んだ塩基配列を確認ののち、この約500bpのcDNAを発現ベクターpcDNA3に組み込み、GnRH DNAワクチンを作成した。これをまず、COS-7細胞に導入すると抗GnRH抗体に反応するたんぱく質の発現を細胞内および培養上清中にみとめた。続いてこのプラスミドを成熟オスマウスの大腿四頭筋に筋肉注射を行った。2〜4週間毎に連続して投与し、免疫反応を抗GnRH抗体価をアルブミンを結合したGnRHペプチドを用いたELISAプレートを作成し、これを用いて検討した。また、プラスミドの発現と免疫反応の強化のために生体内に効率よく遺伝子導入を行うことができるHVJ-Eベクターを用いて、GnRH DNAワクチンを投与した。Vehicle群、GnRH DNAワクチン投与群、HVJ-E-GnRH DNAワクチン投与群でそれぞれの抗GnRH抗体価をELISAの吸光度で比較すると、HVJ-E-GnRH DNAワクチンでもっとも高い抗体価の誘導が認められた。現在、このGnRH DNAワクチン12週間投与後の性腺の形態、造精機能、性行動への影響について検討・解析を進めている。

I 々 が target と す る gonad freeze の た め に ま ず, gonad を inactivity に import す る こ と が favorable で あ る と exam え た. そ こ で I 々 は Ann 価 に GnRH を し, gonad を inhibit す る た め の DNA ワ ク チ ン を test case し た. GnRH を タ ン デ ム に 5 back Qiao り return し, そ の between に ヒ ン ジ a す を construction る traces of artificial 伝 son を プ ラ イ マ ー を elongation method with the い し て た, about 100 ~ 180 bp の 2 this lock を DNA T4 ラ イ ゲ ー ス で し, pBluescript に group み 込 ん だ salt base with column を confirm の の ち, こ の about 500 bp の cDNA を 発 now ベ ク タ ー pcDNA3 に group み 込 み, GnRH DNA ワ ク チ ン を made し た. こ れ を ま ず, COS 7 cells に import す る と GnRH antibody に resistance against 応 す る た ん ぱ く qualitative の 発 now を intracellular お よ び culture supernatant of に み と め た. 続 い て こ の プ ラ ス ミ ド を mature オ ス マ ウ ス の thigh quadriceps muscle に brawn injection line を っ た. 2 ~ 4 weeks between their に even 続 し て cast with し, immune against 応 を GnRH antibody resistance 価 を ア ル ブ ミ ン を combining し た GnRH ペ プ チ ド を with い た ELISA プ レ ー ト を し, consummate こ れ を with い て beg し 検 た. ま た, プ ラ ス ミ ド の 発 now と immune against 応 の strengthening の た め に born in vivo に sharper rate よ く posthumous son 伝 import line を う こ と が で き る HVJ - E ベ ク タ ー を with い て, GnRH DNA ワ ク チ ン を cast with し た. Vehicle group, GnRH DNA ワ ク チ ン cast and group, HVJ - E - GnRH DNA ワ ク チ ン cast with group of で そ れ ぞ れ の GnRH antibody resistance 価 を ELISA の absorbance で compare す る と, HVJ - E - GnRH DNA ワ ク チ ン で も っ と も high い antibody 価 の induced が recognize め ら れ た. Now, こ の GnRH DNA ワ ク チ ン の after 12 weeks between shots and gonads の form, function, sexual action へ の influence に つ い て 検 beg, parsing を into め て い る.

项目成果

Simple and highly efficient method for transient in vivo gene transfer to mid-late pregnant mouse uterus.

简单高效的体内基因瞬时转移至中晚期妊娠小鼠子宫的方法。

• 发表时间: 2006
• 期刊: J Reprod Immunol 70(1-2)
• 作者: Koyama;S.;T.Kimura;K.Ogita;H.Nakamura;C.Tabata;K.Md Abu Hadi Noor Ali;K.Temma-Asano;K.Shimoya;T.Tsutsui;M.Koyama;Y.Kaneda;Y.Murata
• 通讯作者: Y.Murata

In vivo gene transfer into the mouse uterus: A powerful tool for investigating implantation physiology

• DOI: 10.1016/j.jri.2005.06.006
• 发表时间: 2005-10-01
• 期刊: JOURNAL OF REPRODUCTIVE IMMUNOLOGY
• 影响因子: 3.4
• 作者: Kimura, T;Nakamura, H;Murata, Y
• 通讯作者: Murata, Y