レンチウイルスベクターを用いたランダム遺伝子破壊による性染色体機能の解析

使用慢病毒载体通过随机基因破坏分析性染色体功能

• 批准号: 15681011
• 负责人: 伊川 正人
• 金额: $ 17.72万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15681011/
• 关键词: レンチウイルスベクター; 遺伝子組換え動物; 性染色体; 遺伝子改変動物; 遺伝子破壊; cre; loxPシステム

レンチウイルスベクターを受精卵に感染させれば、非常に効率良く多数の遺伝子座にGFP発現遺伝子を組み込むことができる。そのことを利用して、GFP遺伝子を性染色体に組み込むと同時に内在性遺伝子を破壊することにより、性染色体の遺伝子機能を解析することを目的として研究を進めてきた。これまでに、酸性処理による透明帯除去ではなく、ガラスキャピラリーを用いて透明帯と卵の隙間にウイルスを注入するマイクロインジェクション法であれば、必要ウイルス量を減らせるだけでなく、卵へのダメージも少ないことを確認した。また破壊された遺伝子、つまりウイルスベクターが組み込まれた場所を、ランダムプライマーを用いたPCR法により決定する系を確立した。これまでに作製したトランスジェニックマウス系統について、150系統あまりの遺伝子導入部位を決定した。さらにX性染色体にGFP発現カセットが組み込まれたトランスジェニックマウスを用いることで、雌雄の胚を着床前に選別し(X/X雌xX^<GFP>/Y雄の交配で得られる雌胚はすべてX/X^<GFP>、雄胚はすべてX/Yとなり、雌胚のみが緑色蛍光を発する)、雌雄における初期遺伝子発現の比較を行った。その結果、胚盤胞期ではY染色体からDbyおよびEif2s3yが、X染色体からはXistおよびRhox5が特異的に発現していることを明らかにした。さらに解析を進めRhox5がインプリント遺伝子であることを明らかにした。以上のことから、性染色体は着床前の早い時期から性分化の鍵を握っていることが推測された。

The infection rate of the fertilized egg is very high, and most of the vectors are GFP. The use of GFP gene in sex chromosome organization and the analysis of the function of sex chromosome gene in intrinsic sex gene The acid treatment can be used to remove the transparent zone, and the amount of the transparent zone can be reduced. The PCR method was used to determine the origin of the virus. The position of gene introduction is determined in the system of 150. In addition, GFP expression in X chromosome is detected in the preimplantation selection of male and female embryos (X/X female xX^<GFP>/Y male mating, female embryo X/X^<GFP>, male embryo X/Y male, female embryo X/Y green light), and comparison of male and female early embryo development. As a result, the blastoderm cell stage is divided into Y chromosome, Dby chromosome and Eif chromosome 2s chromosome 3 chromosome, X chromosome, Xist chromosome and Rhox chromosome 5 chromosome. Rhox5 is the first time that the text has been translated into Chinese. The sex chromosomes were separated from each other in the early stage before implantation.

项目成果

Selective passage through the uterotubal junction of sperm from a mixed population produced by chimeras of calmegin-knockout and wild-type male mice

• DOI: 10.1095/biolreprod.104.028647
• 发表时间: 2004-09-01
• 期刊: BIOLOGY OF REPRODUCTION
• 影响因子: 3.6
• 作者: Nakanishi, T;Isotani, A;Okabe, M
• 通讯作者: Okabe, M

Distinct roles of IkappaB proteins in regulating constitutive NF-kappaB activity.

• 发表时间: 2005
• 期刊: Nature cell biology
• 影响因子: 21.3
• 作者: V. Tergaonkar;R. G. Correa;M. Ikawa;I. Verma

Neuromedin U has a novel anorexigenic effect independent of the leptin signaling pathway

• DOI: 10.1038/nm1106
• 发表时间: 2004-10-01
• 期刊: NATURE MEDICINE
• 影响因子: 82.9
• 作者: Hanada, R;Teranishi, H;Kojima, M
• 通讯作者: Kojima, M

Inoue N, Ikawa M, Nakanishi T, Matsumoto M, et al.: "Disruption of mouse CD46 causes an accelerated spontaneous acrosome reaction in sperm."Mol Cell Biol. 23(7). 2614-2622 (2003)

Inoue N、Ikawa M、Nakanishi T、Matsumoto M 等人：“小鼠 CD46 的破坏导致精子中自发顶体反应加速。”Mol Cell Biol。

Tergaonkar V, Bottero V, Ikawa M, Li Q, Verma I: "IkappaB kinase-independent IkappaBalpha degradation pathway : functional NF-KappaB activity and implications for cancer thepray"Mol Cell Biol. 23(22). 8070-8083 (2003)

Tergaonkar V、Bottero V、Ikawa M、Li Q、Verma I：“IkappaB 激酶独立的 IkappaBα 降解途径：功能性 NF-KappaB 活性及其对癌症治疗的影响”Mol Cell Biol。