レンチウイルスベクターを用いた網羅的ノックアウトマウスライブラリーの構築

利用慢病毒载体构建综合敲除小鼠文库

• 批准号: 16011236
• 负责人: 伊川 正人
• 金额: $ 2.88万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16011236/
• 关键词: レンチウイルスベクター; 遺伝子改変動物; 遺伝子破壊; cre; loxPシステム

レンチウイルスベクターを受精卵に感染させれば、非常に効率良く多数の遺伝子座にGFP発現遺伝子を組み込むことができる。そのことを利用して、GFP遺伝子を性染色体に組み込むと同時に内在性遺伝子を破壊することにより、網羅的にノックアウトマウスライブラリーを作製することを目的として研究を進めている。今年度は、遺伝子改変動物の作製効率をさらに上げるための検討を行った。具体的には、卵の透明帯があるとウイルスが感染できないので現在は酸性タイロード処理しているが、卵へのダメージが大きいために発生能が低下してしまう。そこでガラスキャピラリーを用いたマイクロインジェクション法を試した。特に顕著な効率化は認められなかったが、胚へのダメージが低く、必要なウイルス量を減らすことが可能であった。またCWプロモーターに比較してCAGプロモーターを用いた場合の方が、安定した遺伝子発現が観察された。次に、破壊された遺伝子つまりウイルスベクターが組み込まれた場所を、LTR内のプライマーとランダムプライマーを用いたPCR法により決定する系を確立した。作製したトランスジェニックマウス系統について、順次、遺伝子導入部位の決定を進めており、これまでに100を超える導入部位の同定に成功した。特に導入されやすい遺伝子座や染色体があるわけではなく、おしなべて殆どすべての染色体に遺伝子導入されていることが確認できており、ランダムな挿入であることが確認された。これらのマウスについては、受精卵や精子による凍結保存を行った。

レ ン チ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を fertilized egg に infection さ せ れ ば, very に sharper rate good く most の heritage 伝 stroma に GFP 発 now heritage 伝 son を group み 込 む こ と が で き る. そ の こ と を using し て, GFP but 伝 を group sex chromosomes に み 込 む と simultaneously に internality heritage 伝 son を broken 壊 す る こ と に よ り, snare に ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス ラ イ ブ ラ リ ー を cropping す る こ と を purpose と し を て research into め て い る. This year, the production efficiency of 伝 and 伝 modified animals is expected to be reduced to をさらに, <s:1>, 検 and を. Specific に は, egg の transparent 帯 が あ る と ウ イ ル ス が infection で き な い の で now は acid タ イ ロ ー ド 処 Richard し て い る が, egg へ の ダ メ ー ジ が big き い た め に 発 birth to low が し て し ま う. そ こ で ガ ラ ス キ ャ ピ ラ リ ー を with い た マ イ ク ロ イ ン ジ ェ ク シ ョ ン method を try し た. Special に 顕 the な sharper rate change は recognize め ら れ な か っ た が, embryo へ の ダ メ ー ジ が low く, necessary な ウ イ ル を ス quantity decrease ら す こ と が may で あ っ た. ま た the CW プ ロ モ ー タ ー に compare し て the CAG プ ロ モ ー タ ー を with い の party が た occasions, stable し た posthumous son 伝 発 now が 観 examine さ れ た. Time に, broken 壊 さ れ た heritage 伝 son つ ま り ウ イ ル ス ベ ク タ ー が group み 込 ま れ を た places, LTR の プ ラ イ マ ー と ラ ン ダ ム プ ラ イ マ ー を with い た PCR method に よ り decided す を る department established し た. Cropping し た ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス system に つ い て, progressive, but 伝 import parts の decided を into め て お り, こ れ ま で に 100 を え る の import parts with fixed に successful し た. Special に import さ れ や す い heritage 伝 stroma や chromosome が あ る わ け で は な く, お し な べ て perilous ど す べ て の chromosome に heritage 伝 son import さ れ て い る こ と が confirm で き て お り, ラ ン ダ ム な scions into で あ る こ と が confirm さ れ た. <s:1> れら れら ウスに ウスに った て て て, fertilized eggs や sperm による are frozen and preserved in を rows った.

项目成果

Selective passage through the uterotubal junction of sperm from a mixed population produced by chimeras of calmegin-knockout and wild-type male mice

• DOI: 10.1095/biolreprod.104.028647
• 发表时间: 2004-09-01
• 期刊: BIOLOGY OF REPRODUCTION
• 影响因子: 3.6
• 作者: Nakanishi, T;Isotani, A;Okabe, M
• 通讯作者: Okabe, M

Neuromedin U has a novel anorexigenic effect independent of the leptin signaling pathway

• DOI: 10.1038/nm1106
• 发表时间: 2004-10-01
• 期刊: NATURE MEDICINE
• 影响因子: 82.9
• 作者: Hanada, R;Teranishi, H;Kojima, M
• 通讯作者: Kojima, M

The LIM homeobox gene, L3/Lhx8, is necessary for proper development of basal forebrain cholinergic neurons

• DOI: 10.1111/j.0953-816x.2004.03415.x
• 发表时间: 2004-06-01
• 期刊: EUROPEAN JOURNAL OF NEUROSCIENCE
• 影响因子: 3.4
• 作者: Mori, T;Zhang, YX;Wanaka, A
• 通讯作者: Wanaka, A

レンチウイルスベクターを用いた遺伝子操作動物作製法

使用慢病毒载体的基因工程动物生产方法

• 发表时间: 2005
• 期刊: 脳21 8
• 作者: M.Ishii;B.Hamilton;伊川正人
• 通讯作者: 伊川正人

Identification of the XPG Region That Causes the Onset of Cockayne Syndrome by Using Xpg Mutant Mice Generated by the cDNA-Mediated Knock-In Method

• DOI: 10.1128/mcb.24.9.3712-3719.2004
• 发表时间: 2004-05
• 期刊: Molecular and Cellular Biology
• 影响因子: 5.3
• 作者: N. Shiomi;S. Kito;Masaki Oyama;T. Matsunaga;Y. Harada;M. Ikawa;M. Okabe;T. Shiomi