レンチウイルスベクターを用いた網羅的ノックアウトマウスライブラリーの構築

利用慢病毒载体构建综合敲除小鼠文库

• 批准号: 15011233
• 负责人: 伊川 正人
• 金额: $ 2.82万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15011233/
• 关键词: レンチウイルスベクター; 遺伝子改変動物; 遺伝子破壊; cre; loxPシステム; ジーントラップ

レンチウイルスベクターを受精卵に感染させれば、非常に効率良く多数の遺伝子座にGFP発現遺伝子を組み込むことができる。そのことを利用して、GFP遺伝子を性染色体に組み込むと同時に内在性遺伝子を破壊することにより、網羅的にノックアウトマウスライブラリーを作製することを目的として研究を進めている。今年度は、レンチウイルスベクターを受精卵に感染させることにより効率良くトランスジェニックマウスが作製できること、ならびにその方法を利用すればプロモーター領域の解析などにも有効利用できることを明らかにし、論文報告した。さらに共同研究としてレンチウイルスベクターを用いたトランスジェニックマウスの作製を行い、ノックアウトマウスのレスキュー実験のように高効率が要求される実験において成功を収めている。現在は、さらに遺伝子改変動物の作製効率を上げるための検討を行っている。具体的には、卵の透明帯があるとウイルスが感染できないので現在は酸性タイロード処理しているが、卵へのダメージが大きいために発生能が低下してしまう。そこでガラスキャピラリーを用いたマイクロインジェクション法を試している。それに並行して、遺伝子破壊を目的としたトラップベクターの構築や、組み込まれた遺伝子座の同定方法についての確立を目指して研究を進めている。破壊された遺伝子の同定は5'-RACE法を、組み込まれた場所の同定はプラスミドレスキュー法を予定しており、それぞれ条件検討を始めている。

Most of the fertilized eggs were infected with the virus and the rate of infection was very high. Most of the zygotes were infected with GFP. This is done through the use of genetic, GFP, sex chromosome, sex chromosome, sex, sex This year, the fertilized eggs are infected with the fertilized eggs. The rate of infection is good. This year, the fertilized eggs are infected with the fertilized eggs. This year, the fertilized eggs are infected with the fertilized eggs. This year, the fertilized eggs are infected with the fertilized eggs. The co-research team was asked to make a joint study in order to achieve a high rate of success. Now, please do not change the operation rate of the action object. In particular, the egg is transparent, the egg is transparent. I don't know what to do. I don't know what to do. The purpose of this study is to ensure that the research is conducted in the same way as in the same way. This method is the same as that of the 5'-RACE method and the organization method.

项目成果

Inoue N, Ikawa M, Nakanishi T, Matsumoto M, et al.: "Disruption of mouse CD46 causes an accelerated spontaneous acrosome reaction in sperm."Mol Cell Biol. 23(7). 2614-2622 (2003)

Inoue N、Ikawa M、Nakanishi T、Matsumoto M 等人：“小鼠 CD46 的破坏导致精子中自发顶体反应加速。”Mol Cell Biol。

Tergaonkar V, Bottero V, Ikawa M, Li Q, Verma I: "IkappaB kinase-independent IkappaBalpha degradation pathway : functional NF-KappaB activity and implications for cancer thepray"Mol Cell Biol. 23(22). 8070-8083 (2003)

Tergaonkar V、Bottero V、Ikawa M、Li Q、Verma I：“IkappaB 激酶独立的 IkappaBα 降解途径：功能性 NF-KappaB 活性及其对癌症治疗的影响”Mol Cell Biol。

Kuramochi-Miyagawa S, Kimura T, Ijiri TW, Isobe T, et al.: "Mill, a mammalian member of piwi family gene, is essential for spermatogenesis."Development. 131(4). 839-849 (2004)

Kuramochi-Miyakawa S、Kimura T、Ijiri TW、Isobe T 等人：“Mill 是 piwi 家族基因的哺乳动物成员，对于精子发生至关重要。”开发。

Ikawa M, Tanaka N, Kao W, Verma I: "Generation of transgenic mice using lentiviral vectors : a nove preclinical assessment of lentiviral vectors for gene therapy"Mol Ther. 8(4). 666-673 (2003)

Ikawa M、Tanaka N、Kao W、Verma I：“使用慢病毒载体生成转基因小鼠：用于基因治疗的慢病毒载体的新颖临床前评估”Mol Ther。

伊川正人, 磯谷綾子, 岡部勝: "GFPマウスを用いたイメージング"Bioベンチャー. 3(6). 86-88 (2003)

Masato Ikawa、Ayako Isotani、Masaru Okabe：“使用 GFP 小鼠进行成像”Bio Venture 3(6)。