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新規p21結合タンパク質TOK-1とc-Mycとの相互作用による細胞周期調節作用

新型p21结合蛋白TOK-1与c-Myc相互作用的细胞周期调节作用

基本信息

批准号：
16790041
负责人：
北浦広剛
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790041/
关键词：
発現制御遺伝子癌蛋白質ゲノム TOK-1 PLZF c-Myc 癌抑制遺伝子 p21 癌化細胞周期サイクリンA

项目摘要

1.c-Myc, p21, TOK-1の相互作用c-Mycが細胞周期調節因子群と相互作用を解析し、Cdk2インヒビターであるp21/Cip1/Sdi/1/Waf1(以下p21で統一)のみがc-Mycと強い結合活性を示した。p21はcdk2のキナーゼ活性を抑制し、同時にPCNAと結合しDNA複製、修復を抑制する。p21はc-Mycの転写活性化ドメインに、c-Mycはp21のPCNA結合領域に拮抗的結合し、p21に複製活性の抑制を解除し、逆にp21はc-Myc転写能を抑制した。これはp21がc-Myc結合配列E-box上のc-Myc/Maxからc-Mycを吸収しMax/Max homodimerに転換することで証明された。更に、p21のPCNA, c-Myc結合領域に結合する因子としてTOK-1と名付けた新規タンパク質を同定した。TOK-1はp21のCdk2活性抑制の促進因子として機能し、G1アレストを起こす細胞周期調節因子であった。TOK-1α単独でc-Mycと複合体形成することでc-Mycの転写活性化の抑制を行っていた。2.TOK-1結合タンパク質の同定TOK-1結合タンパク質を同定するために、FLAG-tagをつけたTOK-1を292T細胞にtransfection後、抗FLAG抗体で免疫沈降し、共沈降するタンパク質をTOF-MS解析した。結果として、Hsp70,Hsp90が得られ、これらの抗体を使って、TOK-1との結合を確認した。TOK-1の新たな機能がこれらのタンパク質との解析により明らかになることが期待された。

1.c-Myc, p21, TOK-1 interaction c-Myc cell cycle cycle factor group interaction analysis, Cdk2 cell cycle c-Myc interaction p21/Cip1/Sdi/1/Waf1 (p21 oneness below) binding activity assay. P21 cdk2 restriction enzyme activity inhibition assay, simultaneous PCNA assay combined with DNA replication, repair suppression assay. The activation of p21 c-Myc gene, the binding of c-Myc p21 DNA PCNA and domain antagonism, the release of inhibition of p21 replication activity, the inhibition of p21 replication activity, and the inhibition of p21 replication activity. This is the combination of p21 c-Myc and column E-box, which is called "c-Myc/Max" c-Myc "absorption" Max/Max homodimer "smoke". Change, p21 PCNA, c-Myc combined with field data, combined with TOK-1 factors, pay for new rules and regulations, and determine the same level. The activity of TOK-1 p21 Cdk2 inhibits the activity of promoters and stimulators, and G _ 1 and G _ 1 activate the cell cycle. The TOK-1 α "single c-Myc" complex forms the inhibition of writing activation, the inhibition of writing activity, and the inhibition of writing activity. The anti-FLAG antibodies were immunoprecipitated and co-precipitated after 2.TOK-1 and TOK-1 292T cell transfection were used to determine the TOF-MS of anti-FLAG antibodies. Results the antibodies of Hsp70,Hsp90 and TOK-1 were confirmed by the combination of Elisa and Elisa. The new TOK-1 machine will be able to tell you that you are looking forward to it.