骨髄osteoblastic-zoneにおける多能性幹細胞の心筋分化の解析

骨髓成骨区多能干细胞向心脏分化的分析

基本信息

  • 批准号:
    17790498
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.24万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
  • 财政年份:
    2005
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2005 至 2006
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

骨髄皮質のnicheから単離したBMECは、in vitroで特定の刺激により骨・脂肪・筋細胞といった間葉系細胞に分化する多能性を有する。BMECの生体内での役割・動態についてはまったく解析されておらず、当研究では主に傷害心筋におけるBMECの関与について中心に解析を行った。GFPでlabelingしたBMECを致死量放射線照射したマウスの頸骨骨髄内に直接注入したGFP-BMEC骨髄移植マウスを作成し、そのマウスに開胸下で冠動脈を絞拡することで広範な心筋梗塞を作った。心筋梗塞作成後、10日間GCSFを連日投与したところ、心臓超音波検査・カテーテル検査上、心機能の改善を認めた。引き続き免疫組織学的解析を行ったところ、心筋組織の間質にGFP陽性の線維芽細胞様の形態を呈した細胞を数多く認めることができた。BMECから明らかに心筋細胞に分化したと考えられるGFP陽性cardiac-actinin陽性の心筋細胞はごくわずかであるが認めることができた。BMEC由来の心筋細胞の分化機構についてあきらかにするため、全身にCre蛋白を発現させた遺伝子改変マウスに、loxP-β geo-loxPEGFPのコンストラクトをもつ遺伝子改変マウスからBMECを採取し骨髄移植を行った。そして再度同様のプロトコールで心筋梗塞モデルマウスを作成し、免疫組織学的解析を梗塞心筋について行ったところ、細胞融合の機構で出現したと考えられるGFP陽性BMEC由来心筋をごくわずか認めることができたが、βgal陽性心筋細胞は同定できなかった。このモデルではBMEC由来心筋細胞自体の数が必要充分ではなかったため、分化機構の評価は困難と考える』現在、BMEC採取・骨髄移植をより高率にできる条件や他の心筋障害モデル(心肥大、薬剤性心筋症)について再度検討を行っている。
Bone marrow cortex の niche か ら 単 from し た BMEC は, the in vitro で の prodding に よ り bone, fat, muscle cells と い っ た mesenchymal cell に differentiation す る pluripotency を have す る. BMEC の born in vivo で の existing cut, dynamic に つ い て は ま っ た く parsing さ れ て お ら ず, when the で は main に hurt heart muscle に お け る BMEC の masato and に つ い analytical line を っ て center に た. GFP で labeling し た BMEC を lethal dose radiation し た マ ウ ス の neck に directly within the bone marrow injection し た GFP - BMEC bone marrow transplant マ ウ ス を し, consummate そ の マ ウ ス に thoracotomy で coronary artery under を ground company す る こ と で hiroo van な heart muscle infarction を as っ た. Heart muscle, 10 day after infarction made GCSF を days cast with し た と こ ろ is crucial, the heart ultrasound 検 Charlie カ テ ー テ ル 検 check on, to improve heart function の を recognize め た. Lead き 続 き immune histologic analysis line を っ た と こ ろ, heart muscle tissue の interstitial に GFP positive の line d bud cells others を is の form し を た cells more く recognize め る こ と が で き た. BMEC か ら Ming ら か に heart muscle cells に し た と exam え ら れ る positive GFP positive cardiac - actinin の heart muscle cells は ご く わ ず か で あ る が recognize め る こ と が で き た. BMEC origin の heart muscle cells の institutions に つ い て あ き ら か に す る た め, systemic に Cre protein を 発 now さ せ た heritage 伝 child change - マ ウ ス に, loxP - beta geo - loxPEGFP の コ ン ス ト ラ ク ト を も つ heritage 伝 child change - マ ウ ス か ら BMEC を take line し bone marrow transplant を っ た. そ し て again with others の プ ロ ト コ ー ル で heart muscle infarction モ デ ル マ ウ ス を made し, immune histologic analysis を infarction heart muscle に つ い て line っ た と こ ろ, cell fusion の institutions appear で し た と exam え ら れ る GFP positive BMEC origin heart muscle を ご く わ ず か recognize め る こ と が で き た が, beta gal は positive heart muscle cells with fixed で き な か っ Youdaoplaceholder0. こ の モ デ ル で は BMEC origin number of heart muscle cells autograft の が necessary to fully で は な か っ た た め, differentiation の institutes 価 は difficult と exam え る, bone marrow transplantation, BMEC taken now "を よ り high rate に で き る condition や he の heart muscle handicap of モ デ ル (heart hypertrophy, 薬 tonic sex disease of heart muscle) に つ い beg を line っ て 検 again て い る.

项目成果

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    大垣 隆一

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