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がん胎児性中性アミノ酸トランスポーター(LAT1)の発現と細胞のがん化機構と制御

癌胎中性氨基酸转运蛋白(LAT1)的表达及其机制和细胞癌变的调控

基本信息

批准号：
12213122
负责人：
遠藤仁
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Kyorin University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

ラットのC6グリオーマ細胞よりクローニングしたL-タイプアミノ酸トランスポーター1(LAT1)をもとにヒトLAT1を単離した。即ち1.ラットのLAT1とLAT2をもとにヒトの腸管と腎よりcDNAライブラリーを作成して、ヒトLAT1とLAT2を分子クローニングした。ツメガエル卵母細胞の発現系を用いて機能解析を行ったところ、hLAT1/4F2hcではLeu,Ile,Phe,Met,Tyr,His,Trp,Valの側鎖を有する分子の比較的大きい必須アミノ酸を含む中性アミノ酸を高親和性に輸送した。他方hLAT2/4F2hcはLAT1の基質に加入、Ala,Ser,Thr,Cys,Asn,Gln,Metなどの比較的小分子の中性アミノ酸をも含むより選択性の広い輸送特性を示した。2.ヒトの手術摘出がん組織でのhLAT1,hLAT2,4F2hcの発現の解析大腸がん、胃がんを中心に病理組織学的結果をhLAT1,hLAT2,4F2hcの各抗体による免疫組織化学染色の結果とをがん組織と非がん部分とに分けて検討した。異型性が強く、未分化像が明瞭な悪性度の高い組織にはhLAT1と4F2hcの染色は細胞膜上に強く検出され、hLAT2抗体による染色性は極めて弱かった。3.ヒト由来がん細胞を用いたin vitro及びin vivoの実験ヒト膀胱がん由来T24細胞はhLAT1/4F2hcを高発現しており、hLAT2の発現は認められなかった。このT24細胞を用いてin vitroの実験系とした。又in vivoの実験としてはICRマウスにマウスsarcoma由来S-180細胞を播種した実験系を用いた。Lタイプアミノ酸輸送の抑制物質のBCH(2-aminobicyclo-(2,2,1)-heptane-2-carboxylic acid)はT24細胞の増殖を強く抑制した。LAT1の特異性をより明確にする為にhLAT1のアンチセンスオリゴを作製して、T24細胞に加えると、増殖を強く抑制した。in vivoのICRマウスを用いたS-180の増殖による個体死はBCHの処置により有意に延命効果を示した。LAT1の機能が細胞の増殖を制御しているという単純明快な機構の存在が本研究により明らかにされた。この機構を利用して、がん組織の悪性度の診断並びにhLAT1/4F2hc系の特異的な抑制による新しいがん治療法の確立が期待される。

ラットのC6グリオーマCell よりクローニングしたL-タイプアミノAcid トランスポーター1(LAT1)をもとにヒトLAT1を単里した. That is ち1.ラットのLAT1とLAT2をもとにヒトのgut and kidneyよりcDNAライブラリーを成して, ヒトLAT1とLAT2をmolecule クローニングした.ツメガエルOocyte present system いてfunctional analysisを行ったところ、hLAT1/4F2hcではLeu,Ile,Phe,Met ,Tyr,His,Trp,Val side lock のするmolecule のrelative large きいmust アミノacid をcontaining むneutral アミノacid をhigh affinity にtransport した. Other hLAT2/4F2hc and LAT1 substrates were added, Ala, Ser, Thr, Cys, Asn ,Gln,MetなどのComparative small molecule neutral アミノacid をもcontaining むよりselected strong の広いtransport characteristics をshow した. 2. The results of surgical extraction of hLAT1, hLAT2, and 4F2hc hLAT1, hLAT2, and 4F2hc and histopathological analysis of the center of the large intestine and stomach The results of immunohistochemistry staining of each antibody of hLAT1, hLAT2, and 4F2hc were divided into parts of tissue and non-organized tissue. The atypia is strong, the undifferentiated image is clear, the sex is high, the tissue is hLAT1 and 4F2hc The staining on the cell membrane is strong and weak, and the hLAT2 antibody staining is extremely weak and weak. 3. The origin of ヒトがんcellsをいたin vitro and びin Vivo's bladder cells are derived from T24 cells, hLAT1/4F2hc and hLAT2 cells. The T24 cells were produced using the in vitro in vitro system. Also in vivoの実験としてはICRマウスにマウスsarcoma origin S-180 cell seeding and use. BCH (2-aminobicyclo-(2,2,1)-heptane-2-carboxylic acid), a substance that inhibits the transport of Lamine acid, is a strong inhibitor of the proliferation of T24 cells. The specificity of LAT1 has been clearly defined as the production of hLAT1, the enhancement of T24 cells, and the enhancement of proliferation and inhibition. In vivo use of ICR S-180 to reproduce the individual's death and treatment of BCH is intended to have a life-prolonging effect. The function of LAT1 is to control the proliferation of cells and control the existence of pure and bright mechanisms. This study is based on the results of this study. We are looking forward to the establishment of a new treatment method that is specific to the hLAT1/4F2hc system and is based on the diagnosis and treatment of hLAT1/4F2hc.