腎毒性予測法の開発

肾毒性预测方法的开发

• 批准号: 07557317
• 负责人: 遠藤 仁
• 金额: $ 3.71万
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07557317/
• 关键词: 近位尿細管直部; 有機アニオン; ジカルボン酸; トランスポーター; ジカルボン酸トランスポーター; 有機アニオントランスポーター; プロスタグランジン; β-ラクタム抗生物質; 腎内輸送; 腎内蓄積; 不死化細胞; 近位尿細管中間部; 近位尿細管終末部; 髄質外層集合管; シスプラチン; アポトーシス; 陰イオン有機酸輸送; デキサメサゾン

平成8年度において、分子クローニングに成功した有機アニオントランスポーター(OAT1)のDNAシークエンス、組織分布、機能解析を実施した。(1)OAT1の化学構造OAT1はアミノ酸551個より成り、そのhydropathy plotより膜12回貫通型のタンパクであり、N末とC末は共に細胞質内に存在する。第一と第二の膜貫通の外側に位置する大きなループには4個のN-糖鎖結合部位が予測される。又第6と第7の膜貫通に連なる細胞質内ループにはC-キナーゼによるリン酸化部位の存在が予測された。(2)組織分布ノザンブロットによりOAT1のmRNAは腎に強く、脳に弱く発現が認められ、他の臓器にはその発現は認められなかった。腎内では皮質に高く分布していた。C末端のペプチドに対する抗体による免疫組織化学染色では近位尿細管の基底側膜にOAT1の局在が認められた。(3)機能解析OAT1のcRNAをアフリカツメガエル卵母細胞に注入した発現系による機能解析では、^<14>C標識パラアミノ馬尿酸(PAH)の取り込みはジカルボン酸との交換輸送であった。Km値は14μMで、輸送基質は内因性物質としてはプロスタグランジン類、cAMP、cGMP、尿酸、ジカルボン酸等、外来性物質としては非ステロイド系抗炎症薬、β-ラクタム系抗生物質、利尿薬、抗腫瘍薬、抗痙攣薬、変換酵素阻害薬、マイコトキシン類などの多岐に及んでいた。以上のOAT1の新しい多選択性輸送機能から類推すると、OAT1は従来より存在が予測されていた腎の有機陰イオン輪送系の主要なトランスポーターである事が判明した。この遺伝子を強制発現させた培養細胞を用いて、各種薬物の腎毒性のスクリーニングが可能と思われる。

Pp.47-53 8 annual に お い て, molecular ク ロ ー ニ ン グ に successful し た organic ア ニ オ ン ト ラ ン ス ポ ー タ ー (OAT1) の DNA シ ー ク エ ン ス, tissue distribution, functional analytic を be applied し た. Chemical structure (1) OAT1 の OAT1 は ア ミ ノ acid 551 よ り り, そ の hydropathy plot よ り membrane type 12 back through の タ ン パ ク で あ り, at the end of the N と C cytoplasm に は altogether に exist at the end of the す る. The first と, the second <s:1> membrane penetrates the に position on the outer side of the <s:1>, the する large <s:1> な, the な, the <s:1>, the プに, and the される four <s:1> n-glycose-locking binding sites が are premeasured される. The 6th と and 7th <s:1> membranes penetrate に and are connected to the なる cytoplasm. There is a が site of <s:1> プに プに <e:1> C-キナ <s:1> ゼによるリ ゼによるリ acidification された present, which is tested された. (2) the organization distribution ノ ザ ン ブ ロ ッ ト に よ り OAT1 の mRNA は kidney strong に く, 脳 に weak く 発 が now recognize め ら れ, he の viscera に は そ の 発 は now recognize め ら れ な か っ た. The で で cortex in the kidney is に with a high く distribution of て た た た. C terminal の ペ プ チ ド に す seaborne る antibody に よ る immunohistochemical staining で は proximal tubule urine の lateral basement membrane に OAT1 の bureau at が め ら れ た. (3) functional analytic OAT1 の cRNA を ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル oocytes に injection し た 発 now is に よ る function analytical で は, ^ < > 14 C logo パ ラ ア ミ ノ hippuric acid (PAH) の take り 込 み は ジ カ ル ボ ン acid と の exchange conveying で あ っ た. Km numerical は 14 microns で, transmission matrix は endogenous substance と し て は プ ロ ス タ グ ラ ン ジ ン, cAMP and cGMP, uric acid, ジ カ ル ボ ン, foreign material such as acid と し て は non ス テ ロ イ ド anti-inflammatory 薬, beta ラ ク タ ム antibiotic substances, diuresis 薬, swollen sores 薬, antispasmodic 薬, variations in enzyme inhibitor against 薬, マ イ コ ト キ シ な ン class Youdaoplaceholder2 に and んで んで た た. Above の OAT1 の new し い multi-select 択 sexual transmission function か ら analogy す る と, OAT1 は 従 to よ り exist が be さ れ て い の organic た kidney Yin イ オ ン wheel to send is の main な ト ラ ン ス ポ ー タ ー で あ る matter が.at し た. こ の posthumous son 伝 を forced 発 now さ せ た culture cell を with い て, various 薬 の nephrotoxicity の ス ク リ ー ニ ン グ が may と think わ れ る.

项目成果

Takeda,M.,Kobayashi,M.,Shirato,I.,Osaki,T.&Endou,H.: "Cisplatin-induced apoptosis of immortalized mouse proximal tubule cells is mediated by interleukin-1β converting enzyme (ICE) family of proteases but inhibited by overexpression." Arch.Toxicol.71. 612-

Takeda, M.、Kobayashi, M.、Shirato, I.、Osaki, T. 和 Endou, H.：“顺铂 - 诱导永生化小鼠近端小管细胞的凋亡是由白细胞介素 1β 转换酶 (ICE) 家族介导的但会被过度表达所抑制。”Arch.Toxicol.71. 612-

Endou,H.,Kanai,Y.,Utsunomiya-Tate,N.&Hosoyamada,M.: "Contrib.Nephrol."Nutritional and acid-base aspects of amino acid metabolism"" Karger, 172 (1997)

远藤 H.、金井 Y.、宇都宫立 N.

Utsunomiya-Tate,N.,Endou,H.and Kanai,Y.: "Cloning and functional characterization of a system ASC-like Na+-dependent neutral amino acid transporter." J.Biol.Chem.271(25). 14883-14890 (1996)

Utsunomiya-Tate,N.、Endou,H. 和 Kanai,Y.：“ASC 样 Na 依赖性中性氨基酸转运蛋白系统的克隆和功能表征。”

M. Hosoyamada, M. Obinata M. Suzuki, H. Endou: "Cisplatin-induced toxicity in immortalized renal cell lines established from transgenic mice harmoring temparature sensitive SV40 large T-antigen gene." Arch. Toxicol.70. 284-292 (1996)

M. Hosoyamada、M. Obinata M. Suzuki、H. Endou：“顺铂诱导的永生化肾细胞系的毒性是由损害温度敏感的 SV40 大 T 抗原基因的转基因小鼠建立的。”

Takeda,M.,Kawamura,T.,Kobayashi,M.& Endou.H.: "ATP-induced calium moblization in glomerular mesangial cells is mediated by P2u purinoceptor." Biochem.Mol.Biol.Int.39(6). 1193-1200 (1996)

武田，M.，川村，T.，小林，M.