成体マウス虹彩組織からの網膜再生研究

成年小鼠虹膜组织的视网膜再生研究

基本信息

批准号：
17700341
负责人：
山本直樹
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

脳神経分野の研究では、神経前駆細胞、および網膜幹細胞のマーカーであるNestin陽性の細胞を選択的に培養する方法として、無血清浮遊培養法のNeurosphere法が知られている。しかし、虹彩を出発点とした網膜幹細胞を培養した場合、このNeurosphere法では継代することに細胞に含まれているメラニン量は減少するが、細胞数も大幅に減少してしまうため、様々な実験や将来の応用性を考えると新しいNestin陽性細胞を選択・培養できる方法を確立する必要があった。そこで、Nestin、および網膜前駆細胞マーカーのPax6陽性の細胞を効率的に選択・培養する方法として、接着培養法でNestin陽性の細胞を効率的に増殖させることができる新しい培養条件を確立した。次に、Nestinは細胞質内タンパクであるため、Nestin陽性細胞をセルソーターや磁気ビーズ法などを用いて選択・濃縮することはできなかった。そこで、Nestin陽性の細胞に共発現する細胞膜表面タンパクの検索を行い、p75NGFR(CD271)を中心としたNeurotrophinファミリーのレセプターが発現していることを見出した。これらの新しく発見した培養条件、および細胞分離方法を用いることにより、従来法と比べると虹彩組織から飛躍的、かつ効率的にNestinやPax6陽性の細胞を作成することができるようになった。更に、p75NGFRでソーティングしたNestin陽性、Pax6陽性細胞をin vitroの実験系で網膜神経細胞へ分化誘導する条件で培養すると、網膜神経細胞マーカー陽性で、細胞形態的にも神経系細胞に分化した細胞を効率的に作成することができることを見出した。

颅神经领域的研究已经知道神经圈方法是一种无血清悬浮培养方法，是一种选择性培养神经祖细胞和巢蛋白阳性细胞的方法，后者是视网膜干细胞的标志物。但是，当培养从虹膜开始的视网膜干细胞时，通过在传递过程中含有细胞中包含的黑色素量，但细胞的数量也大大减少，因此考虑到各种实验和未来的应用，必须建立一种选择和培养新巢蛋白阳性细胞的方法。因此，已经建立了新的培养条件，可以使用粘附的培养方法有效地生长巢蛋白阳性细胞，作为一种有效选择和培养巢蛋白阳性细胞的方法，作为一种有效培养巢穴阳性细胞作为视网膜前体标志物的方法。接下来，由于Nestin是一种细胞质蛋白，因此无法使用细胞分类器或磁珠来选择或富集Nestin阳性细胞。因此，我们搜索了在巢蛋白阳性细胞中共表达共表达的细胞膜表面蛋白，发现神经营养蛋白家族的受体（主要是P75NGFR（CD271））被表达。通过使用这些新发现的培养条件和细胞分离方法，与常规方法相比，可以从虹膜组织急剧有效地产生Nestin或Pax6阳性细胞。此外，发现在诱导分化为视网膜神经元的条件下，在体外实验系统中培养了Nestin阳性和PAX6阳性细胞在体外实验系统中培养时，可以有效地产生对视网膜神经元标记的细胞，对视网膜神经元标记呈阳性，并在细胞神经学细胞中区分为神经系统细胞。