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ロタウイルスにおける遺伝子操作系の確立

轮状病毒基因操作体系的建立

基本信息

批准号：
18790329
负责人：
河本聡志
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

ヘルパーウイルスを用いて11本のうち1本のゲノム2本鎖RNA分節がcDNAに由来する組換えロタウイルスの作製を試みている。最初の弱毒生ロタウイルスワクチンが1998年に開発されたものの、腸重積の副作用の為に市場から撤退した。2006年にも2種の生ワクチンが開発されたが、多様な血清型のヒトロタウイルスに普遍的に効率的な防御能を示すかどうかは、今後の経過を待たねばならない。そこで、新たな世代のロタウイルスワクチンの開発に向け、リバースジェネティクス系を用いてロタウイルス表面エピトープに部位特異的変異を導入し、異なる血清型由来の交叉反応性中和エピトープをキメラに発現する人工組換えロタウイルスの作製を目指した。まず、サルSA11株(P[2])のVP4遺伝子交叉反応性中和エピトープII配列をヒトDS-1株(P[4])に置換したプラス鎖RNA発現プラスミドを構築した。このプラスミドをT7 RNAポリメラーゼを発現する組換えワクシニアウイルスを感染させた細胞に導入し、ヘルパーウイルスとなるヒトKU株を重感染させた後に、KU株に対する特異的中和モノクローナル抗体存在下で培養を行うことで、KU株をベースとし、cDNA由来のVP4キメラ分節を持つ組換えロタウイルスを単離した。VP4交叉反応性中和エピトープ上の5アミノ酸を置換することで、Pタイプ抗原モザイクを有する人工組換えロタウイルスを作製した。この組換えロタウイルスは、エピトープIIについては、P[4]特異的中和モノクローナル抗体と反応し、エピトープIおよびIIIについては、SA11と同様の反応性を呈した。これまでに我々は、ロタウイルス研究者の念願であったロタウイルスにおけるリバースジェネティクス系の開発に成功した。このことから、ロタウイルスにおいてもこの技術を用いて、これまで困難であったロタウイルスの複製機序、病原性を分子論的に解析することが可能となり、人工的な弱毒組換えロタウイルス作出の可能性を示した。現在、これまでに報告したゲノム分節以外へのこの技術の応用を試みている。さらに、この技術を発展させることでロタウイルスの11本で構成される分節ゲノムの全てがcDNA由来となる完全なる人工合成の感染性ロタウイルスの作出を目指したい。

11. The RNA sequence of this gene is composed of 11 genes. The first weak toxin was developed in 1998, and the side effects of intestinal accumulation were withdrawn from the market. In 2006, two new serotypes were developed, and a variety of serotypes were identified. The development of new generations of serotypes and the introduction of site-specific variations in the development of serotypes and the development of artificial components are indicated. The VP4 gene cross-reaction neutralization of DS-1 strain (P[4]) was constructed by replacing the VP4 gene with the VP4 gene of SA-11 strain (P[2]). The T7 RNA sequence was detected by DNA sequencing. After reinfection of KU strain, the KU strain was cultured in the presence of specific neutralizing antibodies. The VP4 sequence was detected by DNA sequencing. VP4 cross-reactive neutralization, 5-amino acid substitution, and manual assembly of VP4 antigen. These groups of antibodies, such as anti-SA11, anti-SA12, anti-SA13, anti-SA14, anti-SA15, anti-SA16, anti-SA17, anti-SA17, anti-SA18, anti-SA19, anti-SA This is a great opportunity for researchers to develop a successful system. This technology is difficult to use, difficult to replicate, and difficult to analyze in molecular theory. It is possible to make artificial attenuated virus groups. Now, this report has to be done in the next section, and this technology has to be tested. In addition, the development of this technology has led to the formation of 11 genes, which are divided into sections, the origin of the whole cDNA and the complete synthesis of infectious genes.