权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

Functional analyses of the type 1 protein phosphatase in guard cells

保卫细胞1型蛋白磷酸酶的功能分析

基本信息

批准号：
19370020
负责人：
SHIMAZAKI Ken-ichiro
金额：
$ 10.65万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19370020/
关键词：
環境応答フォスファターゼ情報伝達気孔リン酸化脱リン酸化

项目摘要

植物におけるタイプ1プロテインフォスファターゼの役割の研究を気孔孔辺細胞に着目して行い以下の成果を得た。まず、この酵素は触媒サブユニットと調節サブユニットがヘテロダイマーを形成して機能を発揮することから、この調節サブユニットの探索から仕事を開始した。その結果、2つの興味ある調節サブユニットの候補が得られたので詳細に解析した。1つはインヒビター3である。まず、機能解析を行うためソラマメのインヒビター3のオーソログを探索した。そのシロイヌナズナのオーソログを用いて試験管内での結合実験を行うとインヒビター3がタイプ1プロテインフォスファターゼの触媒サブユニットとのみ結合し、良く似た配列を持つタイプ2A プロテインフォスファターゼとは結合せず特異的結合であった。インヒビター3は触媒サブユニットの脱リン酸化活性を10nM の濃度で完全に阻害した。さらに、インヒビター3の結合部位に相当するアミノ酸を置換するとこの阻害は消失した。インヒビター3と触媒サブユニットが細胞内で結合している事を、それぞれのタンパク質の抗体によって免疫沈降により、証明した。インヒビター3と触媒サブユニットを孔辺細胞に同時に発現させるとインヒビター3存在時には触媒サブユニットは核と細胞質に存在したが、両者の結合を阻害すると触媒サブユニットは核には存在しなくなった。以上のことから、インヒビター3はタイプ1プロテインフォスファターゼの調節サブユニットと結論された。そこで、インヒビター3の孔辺細胞における機能解析を行うべく、このインヒビター3の遺伝子にT-DNA が挿入されたタグラインを取得し、そのホモラインの採取を試みたが、すべて致死になった。その原因を追及すると、胚発生の段階で成長がストップし、発生の初期段階でインヒビター3がフォスファターゼ活性を制御し、発生をコントロールするものと推定された。また、このインヒビター3のRNAi ラインも同様の表現型を示した。以上から、インヒビター3がタイプ1プロテインフォスファターゼの調節サブユニットとして機能していることが示された。これは植物細胞では初めての例であるが。気孔孔辺細胞における機能解析は不首尾であった。現在、もう一つの調節サブユニットの解析が進行中である。

The results of the research on the plant におけるタイプ1プロテインフォスファターゼのservice cut を気pore hole bed cell に目して行いThe following results are obtained.まず、このEnzyme catalyst サブユニットと regulates the formation of サブユニットがヘテロダイマーをして Function を発 wield することから、この Adjustment サブユニットのExploration から事をStart した.そのRESULTS, 2つのinterestある Adjustmentサブユニットの candidateがgetられたのでDetailed analysisした. 1つはインヒビター3である.まず、FUNCTIONAL ANALYSISを行うためソラマメのインヒビター3のオーソログをExplorationした.そのシロイヌナズナのオーソログを Use the いて test tube inside the での combined with the うとインヒビター3 がタイプ1プロテインフォスファターゼのcatalyst サブユニットとのみcombinationし, 好くsimilarた配arrayをholdつタイプ 2AプロテインフォスファターゼとはcombinationせずSpecific combination であった. The acidification activity of the catalytic dehydration catalyst 3 is 10nM and it is completely inhibited.さらに, インヒビター3のjunction part is equivalent to するアミノacid を replacement するとこの hindering は disappears した.インヒビター3とcatalyst サブユニットが intracellular binding している事を,それぞれのタンパクquality のantibody によってimmunoprecipitation により、proven した.インヒビター3とcatalyst サブユニットをpore cell に発appears させるとインヒビター3 にはcatalyst サブユThe nucleus and cytoplasm are present, and the combination of the two is a hindrance and a catalyst, and the nucleus and cytoplasm are present. Above のことから、インヒビター3はタイプ1プロテインフォスファターゼの Adjustment サブユニットと Conclusion された. Functional analysis of そこで、インヒビター3のKO辺cellにおけるを行うべく、このインヒビター3の缝子にT-DNAがinsert されたタグラインをget し, そのホモラインのtake をtrial みたが, すべて死になった.そのCause すると, Embryonic Birth Stage でGrowth がストップし, 発生のInitial Stage Stage でインヒビター3がフォスファターゼACTIVE をcontrolし,発生をコントロールするものとESTIMATE された.また、このインヒビター3のRNAi ラインも同様のphenotypeをshowした. Above から、インヒビター3がタイプ1プロテインフォスファタAdjust the function of the adjustment function.これは Plant cell では Initial case であるが.気pore pore cells are functionally analyzed and analyzed. Now, the analysis of the adjustment of the サブユニットのが is in progress.