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DNAチップによるウシの超早期妊娠診断法の開発

利用DNA芯片开发牛超早孕诊断方法

基本信息

批准号：
19658101
负责人：
橋爪一善
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Iwate University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19658101/
关键词：
遺伝子マイクロアレイ免疫応答細胞・組織発生・分化

项目摘要

2009年度は、妊娠に関連する遺伝子群を特定し、その内数種の遺伝子を用いた妊娠診断法を検証し、その有効性を明らかにした。1.特異発現遺伝子の発現解析前年度までにマイクロアレイにより同定した妊娠の開始に関連して変動する遺伝子群を妊娠ウシ末梢血白血球中に同定した。末梢血白血球のうち、顆粒球細胞で特異的に変動することを見いだした。今回主として検証した遺伝子はウシの着床直前の初期胚が特異的で多量に産生するインターフェロン・タウに関連する遺伝子、ISG15、Mx1、Mx2、OAS-1である。妊娠14日あるいは21日と妊娠直前に採取した白血球とを比較すると、マイクロアレイ解析では、個体により変動があるが、これら遺伝子はいずれも受胎個体で有意に高発現であった。この発現量は、定量的RT-PCRにより確認できた。末梢血白血球、特に顆粒球に発現するこれら遺伝子群を用いて早期に妊娠診断が可能なことが明らかとなった。2.血液細胞の収集法の開発顆粒球白血球に対象とする遺伝子群が高発現することから、これらの細胞群を効率的に収集する手法を検討し、比重遠心法により目的とする細胞を高濃度に集積できることを確認した。その画分の細胞比率をフローサイトメーターおよび形態学的検証から、集積細胞の90%以上の細胞が目的とする細胞であることが確認できた。3.遺伝子診断法の有効性の検証妊娠前後のウシの血液を採取、顆粒球白血球を分離して、その発現量を比較し、授精後14日目で、発情周期および譜受胎ウシの顆粒球細胞での発現に比較して高発現であることを確認した。これらの結果から、末梢血顆粒球中の特異的な遺伝子を検出することから牛の超早期妊娠診断がかの上有るとの結論に至った。この診断法について現在特許申請中である。

In 2009, the specific diagnosis of pregnancy-related diseases, the use of several pregnancy diagnosis methods, and the effectiveness of pregnancy diagnosis were confirmed. 1. Unusual analysis The relationship between the beginning of pregnancy and pregnancy is the same as the change in peripheral blood white blood cells. Peripheral blood leukocytes and granulosa cells are specific to the action of the action. This time, the main topic is the early stage embryo that is directly before implantation and the specific and large amount of the embryo that is produced.ーフェロン・タウに is related to する伝子, ISG15, Mx1, Mx2, OAS-1 である. On the 14th day of pregnancy and on the 21st day of pregnancy, the white blood cells were collected and compared with the analysis of the white blood cells and the すると and マイクロアレイでは, individual により変动があるが, これら伝子はいずれもconceived individual で有愿発 appear であった. The actual quantity and quantitative RT-PCR were confirmed. Peripheral blood white blood cells and special granules can be used to diagnose early pregnancy. 2. Collection method of blood cells. Efficient collection and collection techniques, specific gravity telecentric method and purpose, high concentration of cells, and high-concentration accumulation are confirmed.その画分の Cell Ratio をフローサイトメーターおよび検证から, The purpose of collecting more than 90% of the cells is to confirm the purpose of the cells. 3. The validity of the postpartum diagnosis method is based on the collection of blood before and after pregnancy, the separation of granular cells and white blood cells, and the comparison of current amounts. , 14 days after insemination, the pregnancy cycle and pregnancy spectrum are compared, and the pregnancy rate is high and the pregnancy rate is confirmed.これらのRESULTSから、Specific な伝子を検出することから牛のULTRA-EARLY PREGNANCY DIAGNOSIS がかの上有るとのCONCLUSIONに～った.このDiagnosis method について is currently applying for a license.