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DNAチップによるウシの超早期妊娠診断法の開発

利用DNA芯片开发牛超早孕诊断方法

基本信息

批准号：
19658101
负责人：
橋爪一善
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Iwate University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19658101/
关键词：
遺伝子マイクロアレイ免疫応答細胞・組織発生・分化

项目摘要

2009年度は、妊娠に関連する遺伝子群を特定し、その内数種の遺伝子を用いた妊娠診断法を検証し、その有効性を明らかにした。1.特異発現遺伝子の発現解析前年度までにマイクロアレイにより同定した妊娠の開始に関連して変動する遺伝子群を妊娠ウシ末梢血白血球中に同定した。末梢血白血球のうち、顆粒球細胞で特異的に変動することを見いだした。今回主として検証した遺伝子はウシの着床直前の初期胚が特異的で多量に産生するインターフェロン・タウに関連する遺伝子、ISG15、Mx1、Mx2、OAS-1である。妊娠14日あるいは21日と妊娠直前に採取した白血球とを比較すると、マイクロアレイ解析では、個体により変動があるが、これら遺伝子はいずれも受胎個体で有意に高発現であった。この発現量は、定量的RT-PCRにより確認できた。末梢血白血球、特に顆粒球に発現するこれら遺伝子群を用いて早期に妊娠診断が可能なことが明らかとなった。2.血液細胞の収集法の開発顆粒球白血球に対象とする遺伝子群が高発現することから、これらの細胞群を効率的に収集する手法を検討し、比重遠心法により目的とする細胞を高濃度に集積できることを確認した。その画分の細胞比率をフローサイトメーターおよび形態学的検証から、集積細胞の90%以上の細胞が目的とする細胞であることが確認できた。3.遺伝子診断法の有効性の検証妊娠前後のウシの血液を採取、顆粒球白血球を分離して、その発現量を比較し、授精後14日目で、発情周期および譜受胎ウシの顆粒球細胞での発現に比較して高発現であることを確認した。これらの結果から、末梢血顆粒球中の特異的な遺伝子を検出することから牛の超早期妊娠診断がかの上有るとの結論に至った。この診断法について現在特許申請中である。

In 2009, pregnancy related genes were identified, and several genes were used to diagnose pregnancy. 1. The first year of the analysis of the occurrence of a specific gene is the same as the beginning of pregnancy. Peripheral white blood cells and granulocytes are specifically activated. This paper reports on the characteristics of the early embryo before implantation, and the characteristics of the early embryo before implantation. It also reports on the characteristics of the early embryo before implantation, ISG15, Mx1, Mx2, OAS-1 and so on. On the 14th day of pregnancy, white blood cells were collected and analyzed. The detection and quantification of this protein were confirmed by RT-PCR. Peripheral blood leukocytes and granulocytes are present in the early stages of pregnancy diagnosis. 2. Blood cell aggregation method for developing granulocyte leukocytes in response to high concentrations of protein and protein The percentage of cells in the aggregate is determined by morphological identification, and more than 90% of cells in the aggregate are identified. 3. The detection of pregnancy before and after pregnancy, blood sampling, separation of granulocytes, and detection of granulocytes were compared. The detection of pregnancy before and after 14 days was confirmed. The results showed that there was no specific gene in peripheral blood granulocytes, and there was no specific gene in early pregnancy diagnosis. This diagnostic method is now licensed in the application.