マクロファージに発現する新規リパーゼを介した動脈硬化メカニズムの解析

巨噬细胞表达的新型脂肪酶介导的动脉硬化机制分析

基本信息

批准号：
07J01519
负责人：
関谷元博
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1)昨年度までは研究対象の酵素MCEHとしていたが、最終的に成果報告時にneutral cholesterol ester hydrolase(NCEH)と修正した。昨年度までにNCEH欠損マウスとHSL欠損ヤウスを交配し二重欠損マウス(DKO)を作成、NCEH、HSLがそれぞれマクロファージのコレステロールエステラーゼ活性の約50%を説明し、二重欠損で野生型の約10%となることを示した。またHSL欠損に比して、NCEH欠損は泡沫化の増強、コレステロールの細胞外放出の低下が強く、DKOでは相加的に2つの酵素欠損の効果が現れていた。これらin vitroの実験の結果を踏まえ、本年度LDL受容体欠損マウスをrecipientとし、wild-type、HSLKO、NCEHKO、DKOをdonorとした骨髄移植実験を行い、マクロファージ特異的にLDL受容体欠損マウスにおいて各酵素を欠損させ、動脈硬化病変を評価すると、in vitroの泡沫化実験と同様の結果となった(en face analysis:HSL欠損:1.9倍、NCEH欠損:2.6倍、DKO:4.7倍、cross-sectional analysis:HSL欠損:1.4倍、NCEH欠損:1.7倍、DKO:2.3倍)。2)昨年度までにNCEH欠損マクロファージが25-hydroxycholesterolにより著明にアポトーシスが誘導されること、そのメカニズムとしては酸化ステロールエステルのERでの蓄積とERストレス経路の関与があることを示していた。本年度apoE欠損マウスにNCEH欠損を加えると、その動脈硬化病変でも著明にアポトーシスが誘導されていることを示した。またLDL受容体欠損マウスはNCEH欠損が加わるとapoE欠損マウスと異なり、血清コレステロール、トリグリセライドが低下し、NCEH欠損によって動脈硬化病変面積が増加しなくなったが、このモデルにおいてもNCEH欠損はアポトーシスを増加させていた。

1）直到去年，MCEH酶被用作研究的靶酶，但是在报告结果时，最终将其修改为中性胆固醇酯水解酶（NCEH）。直到去年，将NCEH缺陷的小鼠与缺乏HSL的Yaus交叉，以创建双重缺陷的小鼠（DKO），NCEH和HSL各自解释了巨噬细胞的胆固醇酯酶活性的约50％，表明双缺陷小鼠大约10％的野生型小鼠大约10％。此外，与HSL缺乏症相比，NCEH缺乏症可以增强泡沫并降低胆固醇的细胞外释放，而DKO表现出两种酶缺陷的添加作用。基于这些体外实验的结果，今年对受体进行了骨髓移植实验，野生型，HSLKO，NCEHKO和DKO作为供体，以及巨噬细胞特异性的LDL受体受体缺乏小鼠缺乏LDL受体受体缺乏的小鼠缺乏LDL受体缺乏的小鼠和artertererioscorsotic siteric oferition sitericossicsotic soritic soritic soritic sotor lestoricsotic soritossic sorito lestotity lestoricsotic sotor lestor lestoricsosics watesition。结果与体外泡沫实验中的结果相似（面部分析：HSL缺乏：1.9次，NCEH缺乏：2.6次，DKO：4.7次：横断面分析：HSL缺乏：1.4次，NCEH缺陷：1.7次，DKO：2.3次：2.3次）。 2）到去年，已经显示出25-羟基胆固醇缺陷型巨噬细胞显着诱导凋亡，并且其机制包括在ER中积累氧化的固醇酯和ER应力途径的参与。今年，当将NCEH缺乏症添加到缺乏APOE的小鼠中时，表明凋亡在动脉硬化病变中显着诱导。此外，与缺乏APOE的小鼠不同，当增加NCEH缺乏症时，血清胆固醇和甘油三酸酯减少，NCEH缺乏阻止了动脉粥样硬化病变区域的增加，但是在该模型中，NCEH缺乏症也增加了细胞凋亡。