Cellular Physiological analysis of peptidergic exocytotic events using primary culture system of isolated GnRH neurons

使用分离的 GnRH 神经元的原代培养系统对肽能胞吐事件进行细胞生理学分析

• 批准号: 20770054
• 负责人: ABE Hideki
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20770054/
• 关键词: GnRH; 開口放出; 脳・神経; 神経修飾; ペプチド放出; 神経ペプチド; 興奮-分泌連関; 細胞培養; ペプチド; イメージング; 遺伝子導入; 生理学; 神経科学; 神経生物学; 細胞・組織; シグナル伝達

To understand the excitation-secretion dynamics of peptidergic neuron from various cellular compartments, we recently established a primary culture system of isolated fish terminal nerve (TN)-gonadotropin releasing hormone (GnRH) neuron. In this study, we examined the electrophysiological properties of the cultured TN-GnRH neurons. They showed subthreshold spontaneous membrane potential oscillations and could be induced to fire in phasic or tonic patterns. Then, we applied a single cell electroporation method for introducing exogenous genes to visually identified TN-GnRH neurons. We successfully introduced plasmids encoding fusion proteins of GFP and exocytotic vesicle components to identified TN-GnRH neurons. Exogenous expression of those genes constructs showed distributions of punctate fluorescence in the soma and neurites. Time-lapse imaging of those fluorescence enabled visualization of movements and exocytosis of peptides in a peptidergic neuron.

为了了解不同细胞区段的肽能神经元的兴奋分泌动力学，我们最近建立了分离的鱼类终末神经(TN)-促性腺激素释放激素(GnRH)神经元的原代培养体系。在本研究中，我们检测了培养的TN-GnRH神经元的电生理特性。它们表现为阈值下自发的膜电位振荡，并能以时相或紧张性模式诱发放电。然后，我们应用单细胞电穿孔方法导入外源基因来直观地鉴定TN-GnRH神经元。我们成功地引入了编码GFP和胞吐囊泡成分的融合蛋白的质粒来鉴定TN-GnRH神经元。这些基因的外源表达在胞体和轴突中呈点状分布。这些荧光的时间推移成像使得能够可视化多肽能神经元中的多肽的运动和胞吐。

项目成果

kiss1パラログ遺伝子kiss2の脳内発現および受容体kiss1/2活性化作用の解析

脑内kiss1旁系同源基因kiss2的表达及kiss1/2受体激活作用分析

• 发表时间: 2009
• 作者: 針山孝彦;ら;三谷優太・赤染康久・河合喬文・阿部秀樹・岡良隆
• 通讯作者: 三谷優太・赤染康久・河合喬文・阿部秀樹・岡良隆

キンギョ嗅球神経回路におけるGnRHペプチドの神経修飾作用

GnRH肽对金鱼嗅球神经回路的神经调节作用

• 发表时间: 2009
• 作者: 河合喬文;阿部秀樹;岡良隆
• 通讯作者: 岡良隆

Calcium oscillation of the olfactory non-sensory cells in the goldfish

金鱼嗅觉非感觉细胞的钙振荡

• 发表时间: 2008
• 作者: Kawai;T.;Abe;H.;Oka;Y.
• 通讯作者: Y.

メダカを用いたGnRH2・GnRH3神経の形態解析と時期特異的機能阻害

青鳉鱼 GnRH2 和 GnRH3 神经元的形态学分析和特定时期的功能抑制

• 发表时间: 2010
• 作者: 高橋晶子;イスラム・サディクル;神田真司;赤染康久;阿部秀樹;大久保範聡;岡良隆
• 通讯作者: 岡良隆

トランスジェニックメダカを用いたGnRH2ニューロンの生理学的解析

使用转基因青鳉对 GnRH2 神经元进行生理分析

• 发表时间: 2009
• 作者: 西川圭;神田真司;阿部秀樹;岡良隆
• 通讯作者: 岡良隆