Aktを介したサーカディアンリズムの制御

通过 Akt 控制昼夜节律

• 批准号: 20659014
• 负责人: 藤田 直也
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20659014/
• 关键词: 癌; 生体分子; 体内時計; 抗がん剤

Aktによるリン酸化を検討するために、時計遺伝子産物CLOCKとBMAL1のトタンパク質を大腸菌に発現させ、GSTタグ付きリコンビナントタンパク質として精製することに成功した。精製済みAktと試験管内で^<32>P-ATP存在下で反応させることにより、時計遺伝子産物のAktによるリン酸化を確認した。さらに、時計遺伝子産物CLOCKとBMAL1の断片タンパク質発現バクターを作製し、各々大腸菌より精製を行なった。本断片タンパク質を用いることにより、時計遺伝子産物CLOCKとBMAL1は数カ所の部位がAktによりリン酸化されることを見いだした。主要なAkt依存的なリン酸化部位について、その部位周辺のリン酸化ペプチドをマウスに免疫することで、時計遺伝子産物CLOCKとBMAL1のリン酸化特異モノクローナル抗体を作製することに成功した。本抗体を用いることで、細胞内でもAkt依存的に時計遺伝子産物CLOCKとBMAL1がリン酸化されていることを確認した。各々のリン酸化部位をアラニンに置換した非リン酸化型時計遺伝子を作製し、Per1プロモーターを用いた時計遺伝子産物の転写活性を検討したが、1カ所のみ変異させたものでは弱い転写活性減少しか認められなかった。主要なリン酸化部位を4カ所ほどアラニンに置換することにより、Akt依存的な時計遺伝子産物CLOCKとBMAL1の転写活性化が顕著に抑制された。よって、Aktは時計遺伝子産物をリン酸化することにより、概日周期の進行に寄与している可能性が示唆された。

The Akt has been successfully acidified, and the products of CLOCK, BMAL1, and GSTs have been successfully detected. There is a negative correlation between Akt and lt;32>P-ATP in the Akt system, which is confirmed by the acidification process. The samples of CLOCK and BMAL1 fragments were used to detect the temperature, and the fine samples of all kinds of bacteria were tested. In this fragment, the parts of the CLOCK BMAL1 that were used to measure the temperature of the fragments were acidified and acidified in the same place. The main Akt-dependent acidified parts were acidified, the surrounding parts were acidified, the immune response was detected, and the time-dependent substrates, CLOCK BMAL1, were successfully acidified. This antibody was confirmed by CLOCK BMAL1 acidification, which is an intracellular Akt-dependent chronograph sub-assay. In each acidified part, the non-thermal acidizing time analyzer is used as the indicator, the Per1 is used to write the active device, and the first time is used to reduce the activity of the device. In the main acidified sites, the main components of the acidified site are the CLOCK BMAL1 device, which is an Akt-dependent chronograph sub-product, which is used to inhibit the activity of the device. It is possible to send and receive information on a daily basis, such as the possibility of sending and receiving information on a daily basis, and the possibility of sending and receiving information on a daily basis, such as the possibility of acidification.

项目成果

Tetraspanin family CD9による転移抑制機構の解析

四跨膜蛋白家族CD9抑制转移机制分析

• 发表时间: 2009
• 作者: 吉田優;依光英樹;大嶌幸一郎;Youya Nakazawa;Youya Nakazawa;中澤侑也;中澤侑也;中澤侑也;Youya Nakazawa;中澤侑也
• 通讯作者: 中澤侑也

ss 1 integrin/Fak/Src signaling in intestinal epithelial crypt cell survival : integration of complex regulatory mechanisms

ss 1整合素/Fak/Src信号在肠上皮隐窝细胞存活中的作用：复杂调节机制的整合

• 发表时间: 2008
• 期刊: Apoptosis 13
• 作者: XD.Zhang;Y.Wang;JC.Wu;X.F.Lin;R.Han;F.Han;K.Fukunaga;ZH.Qin.;Veronique Bouchard
• 通讯作者: Veronique Bouchard

Identification of ABCC2 as an ABC transporter expressed on the side population cells in breast cancer cells

鉴定 ABCC2 作为乳腺癌细胞侧群细胞上表达的 ABC 转运蛋白

• 发表时间: 2009
• 作者: Sanda M;Kamata A;Katsumata O;Fukunaga K;Watanabe M;Kondo H;Sakagami H.;Sumie Koike
• 通讯作者: Sumie Koike

幹細胞様がん細胞のABCトランスポーターと抗がん剤耐性

干细胞样癌细胞中的 ABC 转运蛋白和抗癌药物耐药性

• 发表时间: 2009
• 作者: 片山量平;小池清恵;佐藤重男;杉本芳一;藤田直也;芳賀直実;片山量平;齋藤さかえ;齋藤さかえ;芳賀直実;冨田章弘;片山量平;藤田直也
• 通讯作者: 藤田直也

Dofequidar fumarate sensitizes Side Population cells to chemotherapeutic drugs by inhibiting ABCG2/BCRP-mediated drug export

Dofequidar fumarate 通过抑制 ABCG2/BCRP 介导的药物输出使侧群细胞对化疗药物敏感

• 发表时间: 2009
• 作者: Ryohei Katayama;Yoshikazu Sugimoto;Takashi Tsuruo;Naoya Fujita
• 通讯作者: Naoya Fujita