癌転移に関わる新規血小板凝集誘導因子Aggrusの血小板凝集誘導機構の解析

新型血小板聚集诱导因子Aggrus参与癌症转移的血小板聚集诱导机制分析

• 批准号: 16790046
• 负责人: 藤田 直也
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790046/
• 关键词: Aggrus; 血小板凝集; がん転移; モノクローナル抗体; 肺癌; 糖鎖

新規血小板凝集因子Aggrus/Podoplaninは、がん転移促進に働く膜タンパク質として同定した分子である。実際にがん細胞における発現量がその細胞の転移能に相関していること、さらにaggrusを遺伝子導入したCHO細胞が肺転移を起こすようになることからも、Aggrusががん転移促進に関わる分子である事が明らかとなっている。昨年度までにヒトAggrusを発現しているがんの種類を同定するためにCancer Profiling Arrayを用いた解析を行ない、大腸癌や精巣腫瘍の中のセミノーマ特異的にAggrus高発現が認められることを明らかにしてきた。本年度も継続して検討を行なった結果、Cancer Profiling Arrayにスポットされている肺扁平上皮癌15症例中の10症例(66.7%)でaggrus遺伝子発現が亢進している事を見いだした。そこで肺癌21症例の組織切片を用い、作製した抗Aggrusポリクローナル抗体で免疫染色を行なった。8症例分含まれていた肺扁平上皮癌の組織切片中7症例(87.5%)で強い染色像が得られたのに対し、残りの13症例分含まれていた肺腺癌の中で強染色像が得られたのは2症例(15.4%)にとどまっていた。さらに、正常肺組織で強い染色像が得られたものはなかった。さらに培養細胞株におけるAggrus発現を検討した結果、肺扁平上皮癌由来のNCI-H226細胞株ではAggrus発現が認められたが、肺腺癌由来であるNCI-H23、NCI-H522、A549細胞株では発現が認められなかった。実際にNCI-H226細胞は血小板凝集誘導活性を持っている事が確認された。以上の結果より、Aggrusは肺扁平上皮癌の腫瘍マーカーとなりうる事が示唆された。さらにAggrus発現を減少させるsiRNA配列を決定し、このsiRNA処理によりNCI-H226細胞のAggrus発現を減少させる事に成功した。このsiRNA処理により、NCI-H226細胞の血小板凝集誘導活性が減弱したことから、このsiRNAは、Aggrus高発現癌細胞の転移抑制剤として使用できる可能性が示唆された。

新型的血小板聚集因子aggrus/Podoplanin是一种鉴定为促进癌症转移的膜蛋白的分子。癌细胞中表达的量实际上与细胞的转移潜力相关，并且已通过Aggrus转染的CHO细胞开始引起肺转移，这表明Aggrus是参与促进癌症转移的分子。直到去年，使用癌症分析阵列进行了分析，以识别表达人aggrus的癌症的类型，揭示了Aggrus在结肠癌和睾丸肿瘤中的精液中高度表达。由于今年继续进行调查，我们发现在癌症分析阵列上发现的15例鳞状细胞肺癌中，有10例（66.7％）增加了Aggrus基因表达。因此，使用了21例肺癌病例的组织切片，并用制备的抗吞噬多克隆抗体进行免疫染色。在八例中包括在7（87.5％）的鳞状细胞肺癌的组织切片中获得了强染色图像，而在其余13例中只有2例（15.4％）获得了强染色图像。此外，正常的肺组织都没有产生强烈的染色图像。此外，由于检查了培养的细胞系中的Aggrus表达，在源自肺的鳞状细胞癌的NCI-H226细胞系中观察到Aggrus表达，但在NCI-H23，NCI-H522和A549细胞系中未观察到来自Lung lung ung adenenocarcinoma的A549细胞系。实际上，已经证实NCI-H226细胞具有诱导血小板聚集的活性。以上结果表明，Aggrus可以是鳞状细胞肺癌的肿瘤标记。此外，确定了降低Aggrus表达的siRNA序列，该siRNA处理成功地减少了NCI-H226细胞中的Aggrus表达。这种siRNA处理减轻了NCI-H226细胞的血小板聚集诱导活性，这表明该siRNA可以用作高表达的Aggrus癌细胞的转移抑制剂。

项目成果

Functional sialylated O-glycan to platelet aggregation on Aggrus (Tlalpha/podoplanin) molecules expressed in Chinese hamster ovary cells.

功能性唾液酸化 O-聚糖在中国仓鼠卵巢细胞中表达的 Aggrus (Tlalpha/podoplanin) 分子上促进血小板聚集。

• 发表时间: 2004
• 期刊: J.Biol.Chem. 279
• 作者: Kaneko;M.
• 通讯作者: M.