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卵子内精子注入法を利用した新しい遺伝子欠損マウス維持法の開発

开发一种使用卵巢内精子注射维持基因缺陷小鼠的新方法

基本信息

批准号：
20659025
负责人：
年森清隆
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

【1】卵子内精子注入法を利用した新しい遺伝子欠損マウス維持法の開発のためにODF2 KOキメラマウスを材料にして、そのphenotypeである突起付精子がヘテロマウスに継続して維持されることを指標にして、下記の確認実験を行った。1)電顕レベルでODF2 KOキメラマウスのphenotypeである突起付精子とヘテロマウスのphenotypeである突起付精子の構造を比較したところ、突起部分の構造が同じであり、ヘテロに継続されていた。2)ヘテロマウスに関して次の点が判明した:(1)成熟精子のgenotypingにより、ODF2遺伝子が欠損した精子が確かに存在していること、(2)リアルタイムPCR法により精巣のODF2遺伝子発現量が減少していること、(3)Western blot法によりODF2タンパク質量が減少していること。(4)雄は不妊であるだけでなく、突起付精子の異常形態出現率がキメラマウス雄精子よりも多いこと。【2】精細胞レベルでhaploinsufficiencyがどのように起こるかに関して、下記の点を明らかにした。Western blotと免疫染色を行い、ODF2 KOヘテロ雄マウスの場合は精子形成段階においてhaploinsufficiencyが高率に起こっていた。このことが、成熟精子に見られるphenotypeである頭尾部離断の原因になっていると示唆された。ここまで当初の目的は達した。【3】さらにgeneticなヘテロ出現率とphenotype出現率との相関に関する拡大研究(突起付精子をBDF/F1wild卵子にICSIしてヘテロ雄/雌マウスのN数を増やすこと)を試みたが、十分量を確保するには至らなかったため継続することにした。以上の結果の有用部分について、論文を作成中である。

[1] Intra egg sperm injection method is used to develop and maintain new sperm defects. ODF2 KO is used to develop sperm defects. The phenotype is used to identify sperm defects. 1)The structure of the protrusion part of the sperm is compared with that of the protrusion part of the sperm. 2) The following points were identified:(1) the genotyping of mature sperm, ODF-2 gene loss, and the presence of mature sperm;(2) the reduction of ODF-2 gene expression in mature sperm by PCR;(3) the reduction of ODF-2 gene quality by Western blot. (4)The abnormal morphology of male sperm is more common than that of female sperm. [2] Sperm cells are full of haploinsufficiency. Western blot staining, ODF2 KO, sperm formation stage, haploinsufficiency, high rate The reason why the head and tail are separated is that the mature sperm can be seen in the phenotype. The original goal was achieved. [3] A large number of studies have been conducted on the relationship between genetic and phenotype occurrence rates (ICSI of male/female sperm). The above results are useful in the preparation of papers.