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アデノウイルス感染過程におけるヌクレオプラスミン/B23の機能

核蓝蛋白/B23在腺病毒感染过程中的作用

基本信息

批准号：
09F09138
负责人：
永田恭介
金额：
$ 1.34万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的である、アデノウイルス感染細胞における核小体崩壊の意義を明らかとするため、核小体局在タンパク質B23のアデノウイルス感染サイクルにおける機能解析を行った。アデノウイルス感染細胞の抽出液より抗B23抗体を用いた免疫沈降法を行ったところ、B23がアデノウイルスコアタンパク質との相互作用を介して、ウイルスゲノムと相互作用していることが明らかとなった。次に、B23がアデノウイルスの増殖において重要であるかを検討するため、siRNAを用いてB23の発現量を減少(Knock down : KD)させた細胞におけるアデノウイルスの増殖量を検討した。その結果、B23をKDした細胞においてアデノウイルスの増殖が有意に抑制された。この結果より、B23はアデノウイルスの増殖過程に促進的に機能することが示唆された。さらにB23をKDした細胞におけるウイルスコアタンパク質とウイルスゲノムDNAの相互作用について、抗コアタンパク質抗体を用いたクロマチン免疫沈降法により検討した。その結果、B23のKDにより感染後期においてウイルスコアタンパク質のゲノムDNAへの結合量が減少することが明らかとなった。以上の結果より、B23がアデノウイルス感染後期において、ウイルスゲノムDNAとコアタンパク質の複合体形成に関与する可能性が示唆された。本研究結果は、感染後期においてB23がウイルスゲノムDNAとコアタンパク質の複合体形成の促進を介して、子孫ウイルス粒子形成に関与している可能性を示唆するものであり、アデノウイルス増殖機構において非常に新しい知見である。また、アデノウイルス感染細胞における核小体崩壊について、ウイルスが核小体局在タンパク質を宿主因子として増殖に利用するという1つの意義を見出せたことで、本研究目的の解明に向けて前進できたと考えている。

The purpose of this study is to clarify the significance of nucleosome disruption in infected cells and to analyze the function of nucleosome disruption in infected cells. Anti-B23 antibodies were detected by immunoprecipitation assay in the extract of infected cells, and the interaction between B23 antibodies and B23 antibodies was detected by immunoprecipitation assay. Next, B23 gene expression decreased (Knock down : KD) when it was used in cell proliferation. As a result, B23 was intentionally inhibited by cell proliferation. As a result, B23 is able to perform functions that are facilitated by the propagation process. The B23 protein was detected by immunoprecipitation assay, which was used to detect the interaction between B23 protein and B23 DNA. As a result, B23 KD decreased in the late stages of infection. The above results indicate that B23 may be involved in the formation of DNA and protein complexes in the late stage of infection. The results of this study are very new insights into the possible role of B23 in promoting the formation of DNA and protein complexes in the late stages of infection, and in the formation of progeny particles. The purpose of this study is to clarify the direction of development of nucleosomes in infected cells.