抗体医薬を目指したγセクレターゼ活性阻害抗体の性状解析と応用に関する研究

抑制γ-分泌酶活性的抗体的表征和应用研究，旨在生产抗体药物

基本信息

批准号：
09J10745
负责人：
高鳥翔
金额：
$ 0.9万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

γセクレターゼはアミロイド前駆体蛋白質(APP)を切断し、アルツハイマー病(AD)の発症と密接に関連したAβペプチドを産生することからADの重要な創薬標的である。APP以外にも多数の1型膜蛋白質を基質とし、特にNotchの切断は悪性腫瘍の発症に関わることから、γセクレターゼ阻害剤はADのみならず悪性腫瘍に対してその有効性が期待されている。申請者はγセクレターゼ構成因子であるニカストリン(NCT)の細胞外領域に対してモノクローナル抗体A5226Aを作出し、本抗体が活性型γセクレターゼ複合体中のNCTを特異的に認識すること、またγセクレターゼ活性阻害能を有する中和抗体であることを見出した。本研究課題では、A5226Aの抗体医薬シーズとしての有効性を検証するとともに、新規創薬標的の開発に応用することを目的に研究を遂行した。本年度においては、A5226Aによるγセクレターゼ活性の阻害機構を詳細に解析した。A5226Aはγセクレターゼと基質の結合を阻害し、同時にγセクレターゼの発現量を減少させる間接的な機序を介して基質切断を阻害することを見出した。またA5226Aはγセクレターゼ活性依存的な増殖能を示す癌細胞の増殖を抑制した。さらにin vivoにおける効果を検証するため、γセクレターゼ阻害剤に感受性の白血病細胞株をマウス末梢血中に移植したxenograftモデルを開発、確立した。また申請者はA5226Aをプローブとしてγセクレターゼの新規結合分子を探索した。RNAi条件下でAβ産生量が減少する因子を選択した結果、テトラスパニンファミリー分子のCD81を同定した。CD81はγセクレターゼと基質の細胞表面膜からの輸送に関わることを見出した。

伽玛。泌尿酶是AD的重要药物靶标，因为它裂解了淀粉样蛋白前体蛋白（APP）并产生与阿尔茨海默氏病（AD）发展密切相关的Aβ肽。除APP外，许多类型的膜蛋白被用作底物，并且由于缺口的切割特别涉及恶性肿瘤的发展，因此γ-分泌酶抑制剂有望不仅对AD有效，而且对恶性肿瘤也有效。该申请人在烟碱（NCT）的细胞外区域（NCT）（一种伽马神分泌酶组成）中产生了单克隆抗体A5226a，并发现该抗体在活性γ泌尿酶配合物中特异性识别NCT，并且是一种中和的抗体，具有抑制Gamma suphase suptarase活性的中和抗体。在本研究主题中，我们进行了研究，目的是验证A5226a作为抗体药物种子的有效性，并将其应用于新药物发现靶标的发展。在今年，详细分析了A5226A抑制γ-分泌酶活性的机制。发现A5226A抑制了底物与伽马泌尿酶的结合，并通过间接机制抑制底物裂解，该机制同时降低了伽马泌尿酶的表达水平。此外，A5226A抑制了癌细胞的增殖，癌细胞的增殖表现出取决于γ-分泌酶活性的增殖能力。为了进一步验证体内作用，我们开发并建立了一种异种移植模型，其中将白血病细胞系对γ-分泌酶抑制剂敏感的小鼠外周血液植入。申请人还使用A5226A作为探针来寻找用于γ-分泌酶的新型结合分子。由于选择了在RNAi条件下降低Aβ产生的因子的结果，因此确定了四翼胺家族分子CD81。发现CD81与细胞表面膜的伽马分泌酶和底物的运输有关。