無細胞系を用いた色素性乾皮症C群蛋白質複合体(XPC-hHR23B)の機能解析

使用无细胞系统对着色性干皮病 C 组蛋白复合物 (XPC-hHR23B) 进行功能分析

基本信息

  • 批准号:
    10151227
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.94万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
  • 财政年份:
    1998
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1998 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

色素性乾皮症(XP)は、ヒトの常染色体性劣性遺伝病であり、ヌクレオチド除去修復機構(NER)に欠損をもっAがらGの7つの相補性群に分類されている。NERには、少なくとも2つの機構があり、1つはTCR(transcription-coupled rcpair)、他方はGGR(g10bal genome repair)と呼ばれている。TCRは転写の鋳型鎖上における速い修復、GGRはそれ以外の領域での遅い修復機構である。MPC蛋白質は、他のXP蛋白質とは異なり、GGRにのみ特異的に要求される因子である。我々は、XPC-hHR23Bを同定して解析を行ってきた。本研究では、MPC-hHR23B蛋白質の機能を明かにすることにより、GGRの機構を明かにするとともに、TCR機構解析へ向けての足掛かりとすることを目的とした。NER反応において、MPC-hHR23B複合体および他の因子がどのような順番で損傷DNA上に導入されているのかを明らかにするために、NER反応の競合実験を行った。2つの大きさの異なるプラスミドDNAに、均等に損傷を与えたものを用意し、それぞれ異なる蛋白質と混ぜ合わせた後は、2つの反応系を混合し、どちらのプラスミドが優先的に修復されるかを調べた。MPC蛋白質を欠損しているXP-C群細胞抽出液と、XPA蛋白質を欠損しているXP-A群細胞抽出液間で競合実験を行ったところ、XPA蛋白質よりXPC蛋白質の方が速い段階でNERに関与していることが示された。さらに、精製したXPC-hHR23B複合体と、XP-C群細胞抽出液とについて同様の解析を行ったところ、XPC-hHR238複合体と反応させたプラスミド上での優先的な修復反応が見られた。上記より、XPC-hHR23B複合体は、損傷の認識に関与していると予想される。そこで、XPC-hHR23B複合体の損傷DNA結合活性について検討した。その結果、N-AAAF、紫外線照射、cisplatin処理したものについて、XPC蛋白質の優先的な結合が見られた。さらに、紫外線照射による主要なDNA損傷の一つである(6-4)光産物を一箇所にのみ導入した基質を作成し、DNaseIワットプリント法を行ったところ、XPC-hHR23B蛋白質が、損傷周辺に結合していることを明らかにした。これらの結果より、XPC-hHR23B複合体が、自身で損傷を認識し、NERの開始因子として働いていることが明らかになった。
Xeroderma pigmentosum (XP), ヒトの autosomal dominant genetic disease, であり, ヌクレオチドGo to the repair agency (NER) をもっAがらGの7つのcompatibility groupにcategorizationされている. NERには, 小なくとも2つの体があり, 1つはTCR(transcription-coupled rcpair), other side GGR(g10bal genome repair)とHUばれている. TCR's は転WRITING の鋳-type lock on におけるspeed いrepair, GGR's はそれ other areas での遅いrepair mechanism である. MPC protein は, other のXP protein とはisoなり, GGR にのみspecific にRequirement されるfactor である. I, XPC-hHR23B, have the same resolution and resolution. This study explains the function of MPC-hHR23B protein and the mechanism of GGR. The structure is clear, the TCR mechanism is analyzed, and the TCR mechanism is analyzed. NER resistance, MPC-hHR23B complex resistance, factor loss Injury DNA is imported into the DNA, and the NER is reversed. 2つの大きさのなるプラスミドDNAに, equal damageを andえたものをpurposeし,それぞれisoなるproteinと合ぜ合わせた后は, 2つの Reflection system をmixed し, どちらのプラスミドがprioritized repair されるかを Adjustment べた. MPC protein is damaged, XP-C group cell extract is used, XPA protein is damaged, XP-A group cell extract is used.合実験を行ったところ,さらに, purified したXPC-hHR23B complex と,たところ、XPC-hHR238 complex とanti-reaction させたプラスミドでの Prioritize なrepair anti-reaction が见られた. The above is about the knowledge of the XPC-hHR23B complex, the understanding of the damage, and the thinking of it.そこで、The damaged DNA binding activity of the XPC-hHR23B complex is determined.その results, N-AAAF, ultraviolet irradiation, cisplatin treatment したものについて, XPC protein の preferential binding が见られた.さらに、Ultraviolet irradiationによるMain DNA damageの一つである(6-4) Photoproductを一箇所にのみIntroductionしたMatrixをProducedし, DNa seI ワットプリント法を行ったところ, XPC-hHR23B protein が, damage circumferential binding していることを明らかにした. Result of これらのより, XPC-hHR23B complex が, self-injury を recognition し, NER initiating factor として卍いていることが明らかになった.

项目成果

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