真核細胞の転写-修復共役反応および複製-修復共役反応の無細胞系における解析

无细胞系统中真核细胞转录修复偶联反应和复制修复偶联反应的分析

• 批准号: 09878162
• 负责人: 花岡 文雄
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878162/
• 关键词: 転写; 修復; 複製; 転写-修復共役反応; 複製-修復共役反応; 無細胞系; コケイン症候群

研究代表者および研究分担者は、真核細胞における転写と修復、および複製と修復の各共役反応の無細胞系の構築とその解析を目指して、以下に述べる研究を行った。1)既に我々が確立している、紫外線照射したSV40ミニ染色体を鋳型とする無細胞DNA修復系をベースとして、無細胞転写系に必要な成分を加えたり、あるいは反応条件を転写反応のそれに近付けたりして、転写と修復の共役反応を起こさせるように工夫した。しかしながら条件をどのように振っても、転写と修復の両反応を効率よく起こさせることは出来なかった。2)1)で述べたように、solubleな条件での転写と修復の共役系の構築は困難であったので、この共役には何らかの細胞構造が必要ではないかと考え、分離核での転写-修復共役反応の確立を試みた。特異的阻害剤としてα-アマニチンを用いることにより、HeLa細胞からの分離核系での転写産物にRNAポリメラーゼII(Pol.II)によるものが含まれていること、そして紫外線照射したHeLa細胞から調製した核では、Pol.IIによる転写産物が増加することを見出した。一方、transcription-coupled repairに異常を持つことが知られているコケイン症候群患者細胞からの分離核では、紫外線処理によってPol.IIによると思われる転写産物が消失した。これらのことは、この分離核系が転写-修復共役反応を見るためのよいモデル系であることを示している。3)複製と修復の共役反応については、SV40ウイルスのオリジンを有するプラスミドに1カ所損傷を持たせたものを鋳型として、複製と修復を共役させる試みを始めた。

Research representatives お よ び study share は, eukaryotic cells に お け る planning write と repair, お よ び copy と repair の against the total service 応 の no cell line の build と そ の parsing を refers し て, the following に above べ る を line っ た. 1) both に I 々 が establish し て い る, ultraviolet irradiation し た SV40 ミ ニ chromosome を type where と す る cell-free DNA repair system を ベ ー ス と し て, no cell planning write に な necessary ingredients を added え た り, あ る い は anti 応 conditions を planning to write an 応 の そ れ に nearly pay け た り し て, planning to write と repair の battle against 応 を up こ さ せ る よ う に time し た. し か し な が ら conditions を ど の よ う に vibration っ て も, planning to write と repair の struck against 応 を sharper rate よ く up こ さ せ る こ と は out な か っ た. 2) 1) で above べ た よ う に, soluble な conditions で の planning department の write と repair の total service build は difficult で あ っ た の で, こ の に total service は what ら か の cellular structure が necessary で は な い か と え, separation test nuclear で の planning to write anti - repair service 応 の establish を try み た. Specific resistance against tonic と し て alpha ア マ ニ チ ン を with い る こ と に よ り, HeLa か ら の separation nuclear system で の product planning write に RNA ポ リ メ ラ ー ゼ II (Pol. II) に よ る も の が containing ま れ て い る こ と, そ し て ultraviolet irradiation し た HeLa か ら modulation し た nuclear で は, Pol. II に よ る write が product planning Add する とを とを and you will find that た. One party, the transcription - coupled repair に abnormal を hold つ こ と が know ら れ て い る コ ケ イ ン syndrome patients cells か ら の separation nuclear で は, uv 処 に よ っ て Pol. II に よ る と think わ れ る product planning write が disappear し た. こ れ ら の こ と は, こ の separation が nuclear department planning to write anti - repair service 応 を see る た め の よ い モ デ ル department で あ る こ と を shown し て い る. 3) copy と repair の battle against 応 に つ い て は, SV40 ウ イ ル ス の オ リ ジ ン を have す る プ ラ ス ミ ド に を hold 1 カ injury た せ た も の を type where と し て, copy と repair を "さ せ る try み を beginning め た.

项目成果

Sugasawa,K.et al.: "Two human homologues of Rad 23 are functionally interchangeable in complex formation and stimulation of XPC repair activity." Mol.Cell.Biol.17. 6924-6931 (1997)

Sugasawa, K. 等人：“Rad 23 的两种人类同源物在复合物形成和刺激 XPC 修复活性方面可以功能互换。”

Sasaki,H.et al.: "Dependuce of induction of interphase death of Chinese hamster ovary cells exposed to accelerated heavy ions on linear energy transfer." Radiation Res.148. 449-454 (1997)

Sasaki，H.等人：“暴露于加速重离子的中国仓鼠卵巢细胞间期死亡的诱导依赖于线性能量转移。”

Ishiai,M.et al.: "Isolation of human and fission yeast homelogues of the budding yeast origin recognition complex subunit ORC5L human homologue (ORC5L) maps co 7q22." Genomics. 46. 294-298 (1997)

Ishiai,M.等人：“芽殖酵母起源识别复合物亚基 ORC5L 人类同源物 (ORC5L) 的人类和裂殖酵母同源物的分离，映射到 7q22。”

Masutani,C.et al.: "Identification and characterization of XPC-binding domain of hHR23B" Mol.Cell.Biol.17. 6915-6923 (1997)

Masutani,C.et al.：“hHR23B XPC 结合域的鉴定和表征”Mol.Cell.Biol.17。

Yokoi,M. et al.: "Molecular cloning of the cDNA for the catalytic subunit of plant DNA polymerase α and its cell-cycle dep and ent oxpression." Genes to Cells. 2. 695-710 (1997)

Yokoi, M. 等人：“植物 DNA 聚合酶 α 催化亚基的 cDNA 分子克隆及其细胞周期表达和表达。”Genes to Cells（细胞基因）。