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肝特異的トランスポーターの発現変動におけるエピジェネティック制御機構の解析

肝脏特异性转运蛋白表达变化的表观遗传调控机制分析

基本信息

批准号：
21659037
负责人：
楠原洋之
金额：
$ 1.73万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

OATPmRNAが発現していないHepG2細胞において, MBD2のノックダウンにより肝特異的トランスポーターOATP1B3が誘導されることを昨年度明らかにした。DNAメチル化阻害剤5azadCによる処理でも、OATP1B3の発現誘導が観察されるが、この誘導されるOATP1B3遺伝子の塩基配列を確認したところ、正常肝とは異なる転写開始点から転写が行われており、N末領域が異なる変異型のOATP1B3であることを明らかにした。OATP1B3を内因性に発現するPK-8細胞においても、この変異型のOATP1B3であることを確認した。OATP1B3の新規バリアントの転写開始点近傍のCpG sites (TSS-300～+100の範囲、10箇所)について、DNAメチル化状態をbisulfite sequencing法で解析した。HepG2ならびにPK-8では正常肝で見られる転写開始点付近はメチル化されており、特にPK-8ではメチル化パターンと発現との間に乖離が見られた。しかし、改めてバリアントの転写開始点付近のDNAメチル化状態を確認したところ、正常肝では5'領域ならびに転写開始点下流も高度にメチル化されており、HepG2細胞では(-279、-264、+21)の3箇所において、PK-8細胞で観察されるよりもメチル化が有意であり、これらのサイトが発現抑制に関わっていることが示唆された。この変異型OATP1B3の機能については、さらに検討する必要がある。肝臓特異的に発現するOATPに関しては、DNAメチル化によりその発現が制御されていることを明らかにした。

OATP mRNA is expressed in HepG2 cells, MBD2 is expressed in HepG2 cells, and OATP 1B3 is induced in HepG2 cells. DNA synthesis inhibitor 5azadC treatment, OATP1B3 induction detection, induction, OATP1B3 gene base alignment confirmation, normal liver, abnormal writing start point, N terminal domain, abnormal OATP1B3 detection. OATP1B3 is naturally present in PK-8 cells, and OATP1B3 is naturally present in PK-8 cells CpG sites (TSS-300~+100 range, 10 sites) near the writing start point of OATP1B3 are analyzed by bisulfite sequencing method. HepG2 PK-8 is a normal liver. It is a normal liver. The DNA transformation status near the start point of writing is confirmed in HepG2 cells. The normal liver is 5'domain. The start point of writing is downstream. The DNA transformation status is confirmed in HepG2 cells.(-279,-264,+21), PK-8 cells were detected in the three sites. The function of OATP1B3 is necessary. OATP is involved in the development of liver-specific proteins, and DNA is involved in the development of these proteins.