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Assay development for analyzing high performance antibody selection based on cell-free synthesized GPCR proteoliposome.

基于无细胞合成 GPCR 蛋白脂质体分析高性能抗体选择的测定方法开发。

基本信息

批准号：
24710251
负责人：
TAKEDA Hiroyuki
金额：
$ 3万
依托单位：
Ehime University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

We developed a high-throughput screening method using cell-free synthesized proteoliposome based on AlphaScreen, ELISA, Biacore, respectively. AlphaScreen and ELISA had excellent throughput, thus suitable for primary screening of monoclonal antibodies. Especially AlphaScreen was superior for conformational sensitive antibody selection. Using the methods developed in this study, we conducted screening and functional analysis of anti-GPCR monoclonal antibody. We immunized mice with cell-free synthesized and purified DRD1 proteoliposome and developed 800 hybridoma lines. Primary screening of 800 hybridoma was performed using AlphaScreen and ELISA, respectively, and 36 specific monoclonal antibodies were selected. They were high affinity and applicable for multiple applications. These results demonstrated that the technology based on cell-free synthesized GPCR proteoliposome may provide advantageous materials and assay methods for monoclonal antibody production.

我们分别基于AlphaScreen、ELISA、Biacore开发了一种无细胞合成蛋白脂质体的高通量筛选方法。alphasgreen和ELISA具有良好的通量，适合单克隆抗体的初筛。特别是alphasgreen在构象敏感抗体的选择上具有优势。利用本研究建立的方法，我们进行了抗gpcr单克隆抗体的筛选和功能分析。用无细胞合成纯化的DRD1蛋白脂质体免疫小鼠，获得800株杂交瘤细胞系。分别用alphasgreen和ELISA对800株杂交瘤进行初步筛选，筛选出36株特异性单克隆抗体。它们具有高亲和力，适用于多种应用。这些结果表明，基于无细胞合成GPCR蛋白脂质体的技术可能为单克隆抗体的生产提供有利的材料和检测方法。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

リポソーム添加コムギ無細胞系によるGPCRの発現と抗GPCRモノクローナル抗体作製

使用添加脂质体的小麦无细胞系统表达GPCR并制备抗GPCR单克隆抗体

DOI：
发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
0
作者：
竹田浩之;小笠原富夫;小澤龍彦;村口篤;澤崎達也
通讯作者：
澤崎達也

無細胞タンパク質アレイを用いたプロテインキナーゼおよびユビキチンリガーゼの基質タンパク質探索技術

使用无细胞蛋白质阵列的蛋白激酶和泛素连接酶的底物蛋白质发现技术

DOI：
发表时间：
2013
期刊：
生化学
影响因子：
0
作者：
澤崎達也;竹田浩之;高橋宏隆;根本圭一郎
通讯作者：
根本圭一郎

ポソーム添加コムギ無細胞系によるGPCRの発現と抗GPCRモノクローナル抗体作製

使用添加脂质体的小麦无细胞系统表达GPCR并制备抗GPCR单克隆抗体

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
0
作者：
竹田浩之;小笠原富夫;平賀清貴;遠藤弥重太;澤崎達也
通讯作者：
澤崎達也

澤崎研究室ホームページ

泽崎实验室主页

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Synthesis of GPCR by Wheat Cell-free Protein Synthesis System, Which is Suitable for Biochemical Analysis and Monoclonal Antibody Production

利用小麦无细胞蛋白合成系统合成GPCR，适用于生化分析和单克隆抗体生产

DOI：
发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
0
作者：
Hiroyuki Takeda;Tomio Ogasawara;Tatsuhiko Ozawa;Atsushi Muraguchi;Yaeta Endo;Tatsuya Sawasaki
通讯作者：
Tatsuya Sawasaki

DOI：
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作者：
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シャイネスIATの1年間隔の再検査信頼性――潜在的シャイネスの変容可能性を含めた検討――

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DOI：
发表时间：
2019
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影响因子：
0
作者：
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通讯作者：
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发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
0
作者：
HARA Keishiro;KITAKAJI Yoko;SUGINO Hiroaki;YOSHIOKA Ritsuji;TAKEDA Hiroyuki;HIZEN Yoichi;SAIJO Tatsuyoshi;稲垣勉・澤海崇文・澄川采加;稲垣勉・澤海崇文
通讯作者：
稲垣勉・澤海崇文