Adenoviral vermittelte RNA-Interferenz in Kardiomyozyten

腺病毒介导的心肌细胞 RNA 干扰

• 批准号: 5427523
• 负责人: Professor Dr. Lutz Pott
• 金额: --
• 依托单位: Abteilung für Zelluläre Physiologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2003-12-31 至 2005-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5427523?language=en
• 关键词: Adenoviral; vermittelte; RNA; Interferenz; Kardiomyozyten

RNA Interferenz (RNAi) repräsentiert einen evolutionär konservierten Mechanismus, der den Abbau von mRNAs verursacht, welche homologe Nukleotidsequenzen zu kurzen (ca. 22 nt) doppelsträngigen RNAs (small interfering RNA, siRNA) aufweisen. Der genspezifische Abbau von mRNA mittels siRNA repräsentiert eine innovative Technik, durch die es möglich ist, eine Vielzahl von funktionellen Genomanalysen im Hinblick auf physiologische und pathophysiologische Fragen durchzuführen. In verschiedensten eukaryontischen Zelltypen konnte die genspezifische Zerstörung von mRNA mittels siRNA, nachgewiesen werden. Bisher nicht untersucht ist dieses System an postmitotischen Kardiomyozyten und Neuronen. Hauptziel des beantragten Vorhabens ist die Etablierung einer Methode zur Expression von siRNA zur gezielten Genausschaltung in adulten kardialen Myozyten. Da adulte Myozyten einem Gentransfer mit Hilfe nicht-viraler Vektoren nur schwer zugänglich sind, sollen die siRNA-Moleküle durch ein adenovirales System transkribiert werden. Dazu werden etablierte virale Vektoren so verändert, dass die siRNA Transkription über Promotoren erfolgt, welche die Expression von kurzen RNA Stücken unterstützen. Nach Demonstration der Machbarkeit am Beispiel eines targets mit einer definierten Funktion soll die Methode eingesetzt werden, um die Funktion von RGS-Proteinen in einem kurzen Signalweg zu untersuchen. Der Rückgang der jeweiligen mRNA wird über quantitative real-time PCR-Analysen bzw. bei Verfügbarkeit von Antikörpern auf Proteinebene verifiziert. Funktionelle Konsequenzen der verringerten Expression von RGS Proteinen werden mit Hilfe von Patch clamp Messungen des GIRK Stromes untersucht, dessen Aktivierung/Deaktivierung einen äußerst sensitiven online assay für kinetische Eigenschaften des G-Protein Zyklus der Gi/o-Klasse bieten.

RNA Interferenz（RNAi）代表了一种进化的保守机制，它可以通过mRNAs的同源序列（例如，22 nt）doppelsträngigen RNAs（small interfering RNA，siRNA）aufweisen. Der genspezienhe Abbau von mRNA mittels siRNA repräsentiert eine innovative Technik，durch die es möglich ist，eine Vielzahl von funktionellen Genomanalysen im Hinblick auf physiologische und pathophysiologische Fragen durchzuführen.在真核生物中，Zelltypen可以通过siRNA，然后韦尔登，产生mRNA的Zelltypen。Bisher没有发现这是一个分裂后心肌细胞和神经元系统。早期诊断是一种在成年心肌细胞中表达基因特异性siRNA的方法。通过非病毒载体进行基因转移的药物Myozyten可能会更容易，但可以通过一个腺病毒系统transkribiert韦尔登进行siRNA分子转移。因此，韦尔登建立了一种病毒载体，使siRNA转录子的启动子功能得以发挥，并使病毒RNA的表达得到进一步的研究。在实验室的机器人实验中，通过一种确定功能的方法来确定一个目标，即韦尔登，在一条快速信号通路中研究RGS-Proteinen的功能。采用实时荧光定量PCR技术对珠宝样组织mRNA进行检测。在Antikörpern和Proteinebene的验证中。利用膜片钳技术检测GIRK细胞周期的RGS蛋白韦尔登表达的功能，建立了一种灵敏的在线检测Gi/o-Klasse结合的G蛋白Zyklus的动力学特征的方法。