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骨免疫系血球細胞における網羅的機能遺伝子スクリーニング

骨免疫系统血细胞综合功能基因筛查

基本信息

批准号：
21K18254
负责人：
高柳広
金额：
$ 16.64万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Pioneering)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-07-09 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K18254/
关键词：
CRISPR/Cas9 スクリーニング骨免疫学骨免疫造血幹細胞

项目摘要

血球細胞の分化や機能を制御する遺伝子の同定は疾患治療法の開発に極めて重要であるが、その包括的な理解には至っていない。本研究では、CRISPR/Cas9法による遺伝子スクリーニングによって骨免疫学に関連する血球細胞の分化および機能制御に必要な遺伝子の網羅的同定を目的とした。また、病理的条件下において特異的に誘導・活性化される細胞群について、それらの制御因子の同定を目指す。①破骨細胞の単一細胞遺伝子発現解析およびCRISPR/Cas9法を用いたスクリーニングを実施した結果、破骨細胞の分化を制御する転写因子Aが同定された。in vitroにおいて、転写因子Aの欠損により破骨細胞分化の障害が観察された。また、破骨細胞特異的に転写因子Aを欠損したマウスでは、骨量の増加および破骨細胞数の減少が認められた。今後は、転写因子AにTagを挿入したKIマウスを起点として、転写因子Aの相互作用タンパクの同定やゲノム結合領域の同定を目指す。②滑膜線維芽細胞(SF)におけるRANKLの発現制御を担うエンハンサーとしてE3を同定した。E3欠損マウスは、炎症による骨破壊に抵抗性であり、SFにおけるRANKL発現が低下した。in silico解析およびChIPアッセイにより、転写因子ETS1がE3に結合することが示された。ETS1をSF特異的に欠損するマウスでは、関節炎によって誘導される骨破壊が抑制され、その要因はSFにおけるRANKL発現低下であることが示唆された。以上より、E3とETS1を介したRANKL発現制御機構の一旦が明らかにされ、創薬シーズの発掘に繋がる重要な知見を得た(Yan et al., Nature Immunology 2022)。

Differentiation and function of blood cells are controlled and controlled, and the disease treatment method is very important, including understanding and understanding. This study is , CRISPR/Cas9 method and bone immunology Even the differentiation of blood cells and the function control are necessary and the purpose of the trap is the same.また, において-specific に-induced and activated される cell group について and それらの control factors under the pathological conditions. ①Using the CRISPR/Cas9 method to analyze and analyze osteoclast single cell genes The result of クリーニングを実时时した, the differentiation of osteoclasts and the control factor Aが同定された. In vitro detection, factor A impairment and osteoclast differentiation impairment detection.また, Osteoclast-specific factor A, したマウスでは, increase in bone mass, および, and decrease in the number of osteoclasts, められた. From now on, the 転WRITING factor AにTAGをINSERT したKIマウスをSTARTING として, 転WRITING FACTOR Aの INTERACTION タンパクの同定やゲノムcombination field の同定を目 Refers す. ②The synovial fibroblasts (SF) are the same as RANKL. E3 is damaged due to inflammation, inflammation, bone destruction, resistance, and SF, RANKL is low. in silico analysis およびChIP アッセイにより, 転WRITE factor ETS1がE3にcombination することが Show された. ETS1をSF-specific damage caused by arthritis, arthritis induced bone breakdown, etc. The main reason for suppressing the decline of RANKL is the low level of RANKL. Above, E3 and ETS1 are introduced, and RANKL is now controlled. 2022).