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Elucidation of the mechanism of IL-17A receptor transport focusing on molecular motors

以分子马达为中心阐明IL-17A受体转运机制

基本信息

批准号：
22K06440
负责人：
武井陽介
金额：
$ 2.75万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

炎症性サイトカインIL-17Aが胎児脳ミクログリアのIL-17A受容体に結合するとミクログリアが活性型に転換され、活性化に伴いミクログリアの形態や運動性は大きく変化する。このことはミクログリア活性化に細胞の『形態形成』『運動』を担う構造、すなわち細胞骨格や細胞内輸送機構が関与する可能性を示唆している。そこでミクログリア活性化の基礎となる細胞内輸送機構を解明するために、マウス胎児脳の大脳皮質からミクログリア初代培養細胞を立ち上げた。培養細胞がミクログリアマーカーを発現していることは免疫細胞化学で確認され、ミクログリア初代培養細胞が正しく作成されていることが確認された。研究実施計画に準拠し、細胞内輸送に関わる分子として、分子モーターであるキネシン関連タンパクに注目した。ヒトやマウスの細胞には50種類以上の多種多様な分子モーターが存在し微小管をレールとして細胞内輸送を行っている(Hirokawa et al., Neuron, 2010)。これらのうち、脳に存在する代表的なキネシン関連タンパクであるKIF1A, KIF1B, KIF3A, KIF3B, KIF4, KIF5A, KIF5B, KIF17等について発現を検討することにした。これらのキネシン関連タンパクがミクログリアに発現しているかどうかは道のため、メッセンジャーRNAの発現の検討をRT-PCRで最初に行う方針とした。まず、上記分子のプライマーセットを作成し、コントロール実験で特異的にメッセンジャーRNAを増幅できることを確認した。現在、ミクログリア初代培養細胞に各種プライマーセットを適用し、ミクログリア中に発現しているキネシン関連タンパクの同定と、サイトカイン刺激による発現量の変化を検討している。

Inflammatory cell types IL-17A are associated with fetal cell proliferation and IL-17A receptor binding. This study demonstrates the possibility of cell morphogenesis, cell movement, and intracellular transport mechanisms associated with cell activation. The intracellular transport mechanisms underlying the activation of these proteins were investigated in vitro and in vitro in the fetal cortex. Cultured cells were identified by immunocytochemistry. Primary cultured cells were identified by immunocytochemistry. The research implementation plan focuses on molecules related to intracellular transport and molecular interactions. More than 50 kinds of diverse molecules exist in the cellular system of the cell, and the intracellular transport of these molecules is carried out in tiny tubes (Hirokawa et al., Neuron, 2010)。KIF1A, KIF1B, KIF3A, KIF 3B, KIF4, KIF5A, KIF 5B, KIF17, etc. are represented by the existence of such a relationship. This is the first time that we've been able to detect RNA in RT-PCR. The first step is to make sure that you have the right information. In this paper, we investigate the changes in the amount of various kinds of stimuli in primary culture cells.