课题基金 / 基金详情

転写膜上での酵素活性を指標とした直接遺伝子クローニング技術の開発

転写膜上での酵素活性を指標とした直接遺伝子クローニング技術の開発
以转移膜酶活性为指标的直接基因克隆技术的开发
批准号：
08877032
负责人：
山村 博平
金额：
$1.47万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1996 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877032/
关键词：
遺伝子クローニング法酵素活性ニトロセルロースフィルターDenature-Renature

项目摘要

项目成果

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中文摘要
翻译
我々は、以前よりプロテインキナーゼの酵素活性を指標として蛋白を精製し、部分アミノ酸配列を決定した後、遺伝子クローニングを行ってきた。しかしながら近年、膜フィルター上で失活した酵素活性が復元できる技術が開発され、新しい遺伝子クローニング法へ応用が可能となった。基本原理は、大腸菌から発現ライブラリーで発現させた蛋白を抗体等でスクリーニングする従来の方法をさらに応用し、ニトロセルロースフィルター上で本来酵素活性をもつ蛋白質をグアニジンおよび還元剤処理等によるDenature-Renature法でその高次構造を復現させた後、フィルター上で酵素活性を検出させて目的とするクローンを直接選び出す方法である。この方法が確立すれば既知のあるいは未知の酵素群を直接クローンを選び出すことが可能となり、画期的な遺伝子クローニング法となると考えられる。予備的な実験において単純なプロテインキナーゼの系では成功している。現在、様々な困難に直面しており開発中である。さらなる創意工夫が実用化への鍵になるものと思われる。この方法が確立し、実用化すれば未知の酵素群を精製せずしてクローニングすることが可能となり、画期的な遺伝子クローニングとなると考えられる。
英文摘要
我々は、以前よりプロテインキナーゼの酵素活性を指標として蛋白を精製し、部分アミノ酸配列を決定した後、遺伝子クローニングを行ってきた。しかしながら近年、膜フィルター上で失活した酵素活性が復元できる技術が開発され、新しい遺伝子クローニング法へ応用が可能となった。基本原理は、大腸菌から発現ライブラリーで発現させた蛋白を抗体等でスクリーニングする従来の方法をさらに応用し、ニトロセルロースフィルター上で本来酵素活性をもつ蛋白質をグアニジンおよび還元剤処理等によるDenature-Renature法でその高次構造を復現させた後、フィルター上で酵素活性を検出させて目的とするクローンを直接選び出す方法である。この方法が確立すれば既知のあるいは未知の酵素群を直接クローンを選び出すことが可能となり、画期的な遺伝子クローニング法となると考えられる。予備的な実験において単純なプロテインキナーゼの系では成功している。現在、様々な困難に直面しており開発中である。さらなる創意工夫が実用化への鍵になるものと思われる。この方法が確立し、実用化すれば未知の酵素群を精製せずしてクローニングすることが可能となり、画期的な遺伝子クローニングとなると考えられる。
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会议论文
Qin,S.et.al.: "Syk-dependent and -independent Signaling Cascades in B Cells Elicited by Osmotic and Oxidative Stress." J.Biol.Chem.(in press).
Qin，S.et.al.：“渗透和氧化应激引起的 B 细胞中依赖 Syk 和独立的信号级联。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Minami,Y.et al: "Role of protein-tyrosine kinases in stress signaling" J.Deuterium Sci.5(1). 11-14 (1996)
Minami,Y.et al：“蛋白酪氨酸激酶在应激信号传导中的作用”J.Deuterium Sci.5(1)。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Wang,X.et.al.: "Tyrosine Phosphrylation and Syk Activation Are Involved in Thrombin-Induced Aggregation of Epinephrine-Potentiated Platelets." J.Biochem.121(2). 325-330 (1997)
Wang,X.et.al.：“酪氨酸磷酸化和 Syk 激活参与凝血酶诱导的肾上腺素增强血小板聚集。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Yanagi,S.et.al.: "CD45 Modulates phosphorylation of Both Autophosphorylation and Negative Regulatory Tyrosines of Lyn in B Cells." J.Biol.Chem.271(48). 30487-30492 (1996)
Yanagi,S.et.al.：“CD45 调节 B 细胞中 Lyn 的自磷酸化和负调节酪氨酸的磷酸化。”
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
共 6 条
    マクロファージが自己細胞を認識する機構とその破綻
    • 批准号：
      17659093
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $2.18万
    • 财政年份：
      2005
    • 负责人：
      山村 博平
    • 依托单位：
      Kobe University
    チロシンキナーゼSykが発癌に抑制的に関わる分子機構の解明
    • 批准号：
      16021235
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
    • 资助金额：
      $3.07万
    • 财政年份：
      2004
    • 负责人：
      山村 博平
    • 依托单位：
      Kobe University
    血小板生成の謎に迫る-巨核球から血小板放出へ至る分子メカニズムの解明-
    • 批准号：
      15659070
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Exploratory Research
    • 资助金额：
      $2.11万
    • 财政年份：
      2003
    • 负责人：
      山村 博平
    • 依托单位：
      Kobe University
    細胞増殖およびがんの形成過程におけるチロシンキナーゼSykの機能解析
    • 批准号：
      13216070
    • 项目类别：
      Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
    • 资助金额：
      $2.94万
    • 财政年份：
      2001
    • 负责人：
      山村 博平
    • 依托单位：
      Kobe University
    国内基金
    海外基金
    黄精酵素活性成分动态变化及抗衰老通路调控研究
    • 批准号：
      JCZRLH202601248
    • 项目类别：
      省市级项目
    • 资助金额：
      --
    • 批准年份：
      2026
    • 负责人：
    • 依托单位：
      湖北时珍实验室