上皮細胞の極性分泌経路の起源-TGN-細胞表面間小胞輸送の分子機構-

上皮细胞极性分泌途径的起源 - TGN的分子机制 - 细胞表面囊泡转运 -

• 批准号: 08680772
• 负责人: 吉森 保
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680772/
• 关键词: 分泌経路; 上皮細胞; 極性; 繊維芽細胞; 選別; 細胞膜蛋白質; フッ化アルミニウム; バフィロマイシン

研究代表者が見いだした、繊維芽細胞における上皮細胞に類似したTGN-細胞膜間選別輸送について、研究計画に基づき解析を行い以下の成果を得た。1)これまでの解析に用いてきたBHKとCHO細胞以外にも、イヌの繊維芽細胞由来の培養細胞であるA72でもやはり上皮細胞に良く似た選別があり、先端面類似輸送と側底面類似輸送の2種類の経路が存在することを見いだした。2)当初の研究では、インフルエンザウイルス凝集素とセミリキ森林ウイルスE蛋白質を輸送のマーカーとして追跡してきた。しかしこれらのマーカー蛋白質は外来性であるので、実際に繊維芽細胞が自己の蛋白質を選別しそれぞれの輸送経路に乗せているのかを明らかにするため、内在性の細胞膜蛋白質及び分泌蛋白質を解析した。BHK細胞を^<35>S-メチオニンでパルス標識し、20℃で被輸送蛋白質をTGNに蓄積した後、フッ化アルミニウム存在乃至非存在下で37℃で細胞膜へ輸送させた。フッ化アルミニウムは側底面類似輸送を阻害するが、先端面類似輸送には影響しない。培養液中に現れた分泌蛋白質と、細胞表面のビオチン化で検出される細胞膜蛋白質を、2次元電気泳動とオートラディオグラフィーで解析したところ、全細胞膜蛋白質のうちの5〜10スポットと全分泌蛋白質の多くがフッ化アルミニウムに阻害されずに輸送されていた。従って繊維芽細胞は、内在性蛋白質についても選別を行い別々の経路で輸送していること、細胞膜蛋白質と分泌蛋白質では主に利用する経路が違うことが判明した。3)フッ化アルミニウム以外の薬剤について、この2種類の輸送経路に及ぼす影響を検討した。破傷風毒素とコレラ毒素はどちらにも影響を与えなかった。ブレフェルディンAは両方を阻害したが、先端面類似輸送の阻害が50%であるのに対して、側底面類似輸送はほぼ100%阻害した。分泌経路のオルガネラ内腔を酸性化しているV-ATPaseの阻害剤であるブフィロマイシンとコンカナマイシンはどちらも側底面類似輸送のみを阻害した。

The representative of the research group is similar to the TGN- cell membrane transport agent, and the research project is based on the analysis of the following results. 1) the reason for the use of BHK CHO extracellular cells and germ cells is to culture the epithelial cells of the A72 cells. It is possible to select the right cells, and the front end is similar to the one used to transport the bottom surface. 2) at the beginning of the study, there was a study of lectin, forest protein, E protein, and so on. It is important to determine whether the exogenous protein is exogenous, the international germ cell is responsible for its own protein, the delivery route is sensitive, the intracellular membrane protein is sensitive, and the secretory protein is sensitive. BHK cells ^ & lt;35>S- cells were stored in TGN at 20 ℃, and the cell membrane was stored at 37 ℃ in the presence or even non-existence of proteins. In the system, the bottom surface is like the transmission system, and the front end is like the transmission system. In the culture solution, it was found that the protein was secreted, the cell surface was purified, the cell membrane protein was detected, and the whole cell membrane protein was detected in the culture solution. The whole cell membrane protein was 5%, 10%, 5%, 10%, 5%, 5, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, 10, In order to maintain the germ cell, the internal protein filter is selected to send the cell to the cell, the cell membrane protein to secrete the protein, and the cell membrane protein to identify the cell. 3) in addition to the information system, we need to find out the information, information, and information about the delivery route and the information management system. Break the toxin, the toxin. It is very important to make sure that the system is blocked, the front end is 50%, and the bottom surface is 100%. The secretion of the lumen is acidified, the V-ATPase is blocked, the wound is affected, and the bottom surface is similar to that of the block.