リン酸化定量プロテオミクスによるＴ細胞の正負選択機構の解明

通过定量磷酸化蛋白质组学阐明T细胞的正/负选择机制

• 批准号: 13J03508
• 负责人: 舟崎 慎太郎
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J03508/
• 关键词: リン酸化プロテオミクス; T細胞; シグナル伝達; 正負の選択; リン酸プロテオミクス

前年度までに、「phospho-iTRAQ法」によるリン酸化プロテオミクスによって、正負の選択刺激後のリン酸化変化を捉えた。これを受け、まずいくつかのリン酸化基質分子に対する評価を胸腺組織培養法、および胸腺DP由来であるDPK細胞によって行った。まず、機能未知分子に関してレトロウイルスによるshRNAベクターを用いてノックダウンを行い、通常のT細胞分化へ与える影響を調べた。現在までに、複数の分子について解析を行ったが、これまで胸腺細胞分化を顕著に抑制する分子は見つかっておらず、引き続き解析を行っている。一方、機能既知のシグナル伝達分子に関して、リン酸化変異体の過剰発現細胞株を作製し、TCR刺激後のERKのリン酸化変化やカルシウムシグナル伝達へ与える影響を調べた。このうち一つの分子について、リン酸化出来ないSA変異体においてカルシウムシグナルが抑制され、さらにリン酸化疑似変異体であるSD変異体ではそのシグナルが増強されることが分ったため、現在はさらにこのリン酸化部位の生理的な機能解析を進めている。また、より詳細にリン酸化変動の全体像を明らかにするために、近年用いられているspike-in SILACによる代謝ラベルでの定量法よってリン酸化プロテオミクスを行った。複数の再現測定の結果、正と負の選択刺激によって異なるリン酸化変動を含む分子を多数新たに同定したため、これらのリン酸化基質分子についても胸腺組織培養法と変異体作製による機能解析を進めている。

The previous year's までに, "phospho-iTRAQ method" によるリン acidified プロテオミクスによって, positive and negative のselected stimulation のリン acidified change を catch えた.これをReceived, まずいくつかのリンAcidified matrix molecule に対するreview価をthymus tissue culture method, およびThymus DP origin であるDPK cells によって行った.まず, unknown molecule に关してレトロウイルスによるshRNAベクターIt is used to adjust the T cell differentiation and normal T cell differentiation. Now the analysis of までに、plural molecule についてを行ったが、これまでthymocyte differentiationを顕敕に inhibits するmolecule は见つかっておらず, cites き続きanalytic を行っている. On the one hand, the functionally known molecular molecule and the Rino acidified allogeneic cell line were produced. , after TCR stimulation, the acidification of ERK is changed and the effect of ERK is changed.このうち一つのmolecule について, リン acidified out ないSA 変 isomer においてカルシウムシグナルが inhibits され, さらにリン acidifies the suspected variantあるSD変variantではそのシグナルが Increase Strengthされることが分ったため、 Now we will analyze the physiological functions of the acidified parts of the body.また、よりDetails of the overall image of にリンacidification changeのを明らかにするために、In recent years, いられているspike-in SILAC Metabolism Quantitative Method for Metabolism and Acidification of Metabolism. The results of complex reproduction measurement, positive and negative selection stimulation, different acidification changes, molecular changes, multiple new ones, and the same determination.ため, これらのリン acidified matrix molecule についても thymus tissue culture method and allogeneic production による functional analysis をめている.