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ペスチウイルスの病原性発現の分子機構に関する研究

瘟病毒致病性表达的分子机制研究

基本信息

批准号：
13J01199
负责人：
田村友和
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Osaka University (2015)Hokkaido University (2013-2014)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-26 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、ペスチウイルスの病原性発現の分子メカニズムを明らかにすることを目的とする。平成27年度は以下の研究を実施した。I. ウイルスの複製に関与するウイルス蛋白と宿主因子の検索および同定　　豚コレラウイルスの病原性発現に関与する非構造蛋白NS4BのN末端領域に認めた両親媒性ヘリックスのゲノム複製における役割を調べた。まず、非構造蛋白NS4BのN末端領域の二次構造をコンピュータソフトを用いて予測した。その成績を基に細胞内膜への親和性を膜分画アッセイおよび共焦点レーザー顕微鏡にて解析し、非構造蛋白NS4Bの細胞内膜への親和性に関与するアミノ酸部位を同定した。さらに、リバースジェネティクス法にて作出したレプリコンおよびウイルスを用いて両親媒性のヘリックス構造のウイルス感染環における役割を解析した。その結果、NS4BのN末端領域に認めた両親媒性のヘリックスはウイルスのゲノム複製およびその増殖に必須の構造であることがわかった。次に、非構造蛋白NS4Bと相互作用する蛋白質を哺乳動物ツーハイブリッド法にて検索した。その結果、NS4B蛋白のC末端領域とNS5A蛋白は相互作用することが明らかになった。II. ウイルスの宿主指向性に関与する宿主因子の検索および同定　　これまでに同じペスチウイルス属の牛ウイルス性下痢ウイルスは、宿主細胞のCD46およびLDLをレセプターとして細胞への侵入の際に利用することが明らかにされている。ブタのCD46と結合すると考えられる領域の近傍に、これまでに同定した豚コレラウイルスの病原性発現に関与するE2分子上のアミノ酸部位が存在した。本年度は、CD46が豚コレラウイルスの宿主指向性を規定する因子であるかを検するため、CRISPR-Cas9システムを用いてCD46を欠損した細胞を樹立することとした。

In this study, the etiology of pathogenicity was detected by molecular markers. The following studies have been conducted in Pingcheng in the year 27. i. The pathogenicity was identified in the same way as that of the host factor (host factor). The pathogenicity was detected in the N-terminal domain of NS4B. The N-terminal domain of non-protein-making NS4B is used for the second time. The endometrium and the sexual membrane are divided into two parts: the common focus, the microanalysis, the non-proteogenic NS4B, the intima and the sexual membrane. In this case, the environmental protection system is used to analyze the impact of infection in the environment. The results show that the NS4B N-end domain information system must be used to replicate the replication of the host computer. Secondary and non-fibrogenic NS4B interactions, proteins, lactation animals, breast-feeding animals, breast-feeding animals, The results showed that the C-terminal domain of NS4B protein and the interaction between NS5A protein and protein showed significant difference. ii. The host directivity is the same as that of the host factor. This is the same as that of the host factor. The host cell is the same as that of the host factor. The host cell is CD46, the host cell is LDL, and the host cell is invading. In combination with CD46, we tested the presence of antifungal acid on E2 molecule and the presence of pathogenicity. This year, the CD46 Dolphin Dolphin has been shown to be a host directive. This year, it is stipulated that the host directivity is related to the number of factors, and that the CRISPR-Cas9 is responsible for using the CD46 to determine the cell temperature.