Korrektur des genetischen Defektes mittels Zinkfingernukleasen (ZFN) bei der GM1-Gangliosidose des Alaskan Husky

[中英文摘要][中英文摘要]在Einer 19bp重复扩增的情况下，GM1-Gangliosidose bem Alaskan Husky(-Galaktosidase(-Galaktosidase)liegt.Deser Genetische Defekt Hat Eine戏剧性的减少(-Galaktosidase-Aktiität be produktion der soren(-Galaktosidase-Aktiität be produktion der produktion der soduktion)kranken tieren zur Folge.Ausgehend von diesen Befunden bildet die depopothes，dass eine reparatur des mutierten Gensmittels Zinkinger nukleasen(ZFN)Induzerten DNA-StrangbüChen and HomomererRekombination(DHR-SB-MIT)MIT inSpezifischen DNA-Matrize möich glist，die Grundlage f f Matrize möich glist，die Grundlage f fürüdioregeshene Studie)。在此之前，我们的工作主要集中在以下几个方面：一种是溶酶体，另一种是生活方式，另一种是传统的生活方式，一种生活方式，一种生活方式。这是一种特殊的变态反应治疗方法，它是一种特殊的变态反应治疗方法。在Desem Zusammenang Stellt De Wiederherstellung des Wildtyp-Genotyps Durch Geneditierung eine创新的DAR替代方案。这是Daher das Zieldieses Projektes，die Wiederherstellung des Wildtyp(-Galaktosidase-gen in einem kaninenModelder GM1-Gangliosidose)，并在体外验证治疗方法的有效性。在Kanine Fibroblasten EingHRT and Diememutierte Genequenz repariert中，我们看到了Lentiviralen Vektors in Kanine Fibroblasten eingeführt and diememutierte te Genequenz repariert。Um die Möglichkeiten einer Genreparatur imGesamtOrganizmus Studdieren zu können，Sollen lentivirale Genvektoren in Genetisch veränderteMäuse(Glb1-/-，Tg(CanGLB1mut))eingefüHRT weden，die das Kanine mutierte Glb1mut Allel alsTransgen auf einem Glb1-Defizienten(Glb1-/-)Hintergrund tragen.这是一种新的治疗策略，是一种新的治疗方法。

Eigene umfängliche molekulare Untersuchungen der letzten Jahre haben gezeigt, dass die Ursacheder GM1-Gangliosidose beim Alaskan Husky in einer 19bp Duplikation innerhalb des Exon 15 derkaninen sauren (-Galaktosidase (GLB1) liegt. Dieser genetische Defekt hat eine dramatischeReduktion der sauren (-Galaktosidase-Aktivität bei homozygot kranken Tieren zur Folge.Ausgehend von diesen Befunden bildet die Hypothese, dass eine Reparatur des mutierten Gensmittels Zinkfingernukleasen (ZFN) induzierten DNA Doppel-Strangbrüchen und homologerRekombination (DSB-HR) mit einer spezifischen DNA-Matrize möglich ist, die Grundlage für dievorgesehene Studie. Während die meisten Ansätze zur Behandlung lysosomalerSpeicherkrankheiten zur Zeit auf der Wiederherstellung des normalen Phänotyps durch Einfügendes Wildtyp-Gens beruhen, finden sich nur wenige Studien, die eine Reparatur des defekten Gensanstreben. Diese „klassischen“ Wiederherstellungs-Therapieansätze weisen allerdings spezifischeNachteile wie z.B. ein abnormales Expressionsniveau, aleatorisches Einfügen des exogenen Genssowie die Notwendigkeit einer regelmäßigen Wiederholung der Therapie zur Aufrechterhaltung desWildtyp-Phänotyps auf. In diesem Zusammenhang stellt die Wiederherstellung des Wildtyp-Genotyps durch Geneditierung eine innovative dauerhafte Alternative dar. Es ist daher das Zieldieses Projektes, die Wiederherstellung des Wildtyp (-Galaktosidase-Gens in einem kaninenModell der GM1-Gangliosidose in vitro durchzuführen und die Validität dieses therapeutischenAnsatzes aufzuzeigen. Hierzu sollen polyzistronische Expressionsvektoren, die ZFN und repairtemplates beinhalten, mittels eines lentiviralen Vektors in kanine Fibroblasten eingeführt und diemutierte Gensequenz repariert werden. Um die Möglichkeiten einer Genreparatur imGesamtorganismus studieren zu können, sollen lentivirale Genvektoren in genetisch veränderteMäuse (Glb1-/-, Tg(canGLB1mut)) eingeführt werden, die das kanine mutierte Glb1mut Allel alsTransgen auf einem Glb1-defizienten (Glb1-/-) Hintergrund tragen. Die erfolgreiche Umsetzungdieses Versuchsvorhabens wird Wege für neue therapeutische Strategien zur Behandlung vonErbkrankheiten bei Mensch und Tier aufzeigen.