Identification and analysis of novel genes of amyotrophic lateral screlosis

筋萎縮性側索硬化症(ALS)は、根本的な治療法が確立されていない神経難病であり、原因の解明、根本的治療法の開発が求められている。我々 は、阿蘇山麓由来のALSの2家系から第3世代シーケンサーであるロングリードシーケンサーを用いて、リピートの伸長を見出した。阿蘇出身の2家系に加えて、さらに３家系においてNanopore シーケンサーによるリピート数の確認、および家系内の検体、臨床情報の収集を進めた。孤発性においても２人リピートの伸長を認めた。弧発例のうち１人は、上位運動ニューロン徴候をしめし発症後2年で気管切開となる典型的なALSであったが、他の陽性者は、家族例も含めて、基本的に緩徐進行型で上位ニューロン徴候はあっても弱い進行性筋萎縮症に属する患者であった。iPS細胞による病原性の検討では、患者末梢血由来単核球に初期化遺伝子を導入し、７人のiPS細胞を作製した。染色体解析を行い、正常核型を確認した。下位運動ニューロンについては、piggy bacトランスポゾンベクターによ るmaster geneの導入とドキシサイクリンで分化を誘導するシステムを利用し、iPS細胞株に、Piggy bacベクターを導入し、stable lineの作製、ドキシサイクリンによる下位運動ニューロンの分化誘導を行い、運動ニューロンへの分化を確認し、原因遺伝子産物の局在を検討した。リン酸化TDP-43の核外への局在化、さらに表現型解析を行った。リピートRNAを検出するために、in　situ hybridyzationを行い、核内封入体を確認した。

筋萎縮性側索硬化症(ALS)は、根本的な治療法が確立されていない神経難病であり、原因の解明、根本的治療法の開発が求められている。我々 は、阿蘇山麓由来のALSの2家系から第3世代シーケンサーであるロングリードシーケンサーを用いて、リピートの伸長を見出した。阿蘇出身の2家系に加えて、さらに３家系においてNanopore シーケンサーによるリピート数の確認、および家系内の検体、臨床情報の収集を進めた。孤発性においても２人リピートの伸長を認めた。弧発例のうち１人は、上位運動ニューロン徴候をしめし発症後2年で気管切開となる典型的なALSであったが、他の陽性者は、家族例も含めて、基本的に緩徐進行型で上位ニューロン徴候はあっても弱い進行性筋萎縮症に属する患者であった。iPS細胞による病原性の検討では、患者末梢血由来単核球に初期化遺伝子を導入し、７人のiPS細胞を作製した。染色体解析を行い、正常核型を確認した。下位運動ニューロンについては、piggy bacトランスポゾンベクターによ るmaster geneの導入とドキシサイクリンで分化を誘導するシステムを利用し、iPS細胞株に、Piggy bacベクターを導入し、stable lineの作製、ドキシサイクリンによる下位運動ニューロンの分化誘導を行い、運動ニューロンへの分化を確認し、原因遺伝子産物の局在を検討した。リン酸化TDP-43の核外への局在化、さらに表現型解析を行った。リピートRNAを検出するために、in　situ hybridyzationを行い、核内封入体を確認した。