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Identification and analysis of novel genes of amyotrophic lateral screlosis

肌萎缩侧索硬化新基因的鉴定与分析

基本信息

批准号：
21H04818
负责人：
川上秀史
金额：
$ 26.96万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-05 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

筋萎縮性側索硬化症(ALS)は、根本的な治療法が確立されていない神経難病であり、原因の解明、根本的治療法の開発が求められている。我々は、阿蘇山麓由来のALSの2家系から第3世代シーケンサーであるロングリードシーケンサーを用いて、リピートの伸長を見出した。阿蘇出身の2家系に加えて、さらに３家系においてNanopore シーケンサーによるリピート数の確認、および家系内の検体、臨床情報の収集を進めた。孤発性においても２人リピートの伸長を認めた。弧発例のうち１人は、上位運動ニューロン徴候をしめし発症後2年で気管切開となる典型的なALSであったが、他の陽性者は、家族例も含めて、基本的に緩徐進行型で上位ニューロン徴候はあっても弱い進行性筋萎縮症に属する患者であった。iPS細胞による病原性の検討では、患者末梢血由来単核球に初期化遺伝子を導入し、７人のiPS細胞を作製した。染色体解析を行い、正常核型を確認した。下位運動ニューロンについては、piggy bacトランスポゾンベクターによるmaster geneの導入とドキシサイクリンで分化を誘導するシステムを利用し、iPS細胞株に、Piggy bacベクターを導入し、stable lineの作製、ドキシサイクリンによる下位運動ニューロンの分化誘導を行い、運動ニューロンへの分化を確認し、原因遺伝子産物の局在を検討した。リン酸化TDP-43の核外への局在化、さらに表現型解析を行った。リピートRNAを検出するために、in　situ hybridyzationを行い、核内封入体を確認した。

Atrophic Lateral Sclerosis (ALS) is a disease of neurosis that has been diagnosed and treated for several years. The two families of ALS originated in the foothills of Asu Mountain were separated from each other in the third generation. 2 families of Asu origin, 3 families of Nanopore, identification of the number of patients, and collection of clinical information within the family 2 people in the middle of the night In the case of ALS, the upper motor characteristics are similar to those in the case of ALS 2 years after onset. Pathogenic assay of iPS cells, introduction of primary DNA from peripheral blood of patients, and production of iPS cells from 7 individuals Chromosome analysis, normal karyotype confirmation The introduction and differentiation of master gene into iPS cell line, the introduction of piggy bac, the operation of stable line, the induction and differentiation of lower motor gene, the identification and differentiation of motor gene, and the investigation of gene products are discussed. Phenotype analysis of TDP-43 in vitro was performed. RNA is detected in situ hybridization, and nuclear inclusions are identified.

项目成果

期刊论文数量（14）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

TDP-43 Accumulation Within Intramuscular Nerve Bundles of Patients With Amyotrophic Lateral Sclerosis

肌萎缩侧索硬化症患者肌内神经束内 TDP-43 的积累

DOI：
10.1001/jamaneurol.2022.1113
发表时间：
2022
期刊：
JAMA Neurology
影响因子：
29
作者：
Kurashige Takashi;Morino Hiroyuki;Murao Tomomi;Izumi Yuishin;Sugiura Tomohito;Kuraoka Kazuya;Kawakami Hideshi;Torii Tsuyoshi;Maruyama Hirofumi
通讯作者：
Maruyama Hirofumi

Comparison of two families with and without ataxia harboring novel variants in PRKCG