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海洋無脊椎動物からの抗トロンビンリード化合物の探索

从海洋无脊椎动物中寻找抗凝血酶先导化合物

基本信息

批准号：
10760123
负责人：
中尾洋一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

伊豆半島,伊豆諸島,九州沿岸,および南西諸島などで採集した海洋無脊椎動物サンプル計342検体(海綿239,腔腸78,原索18,および外肛7検体)について,動物試料20gをアルコールおよびアセトンで抽出し,水とクロロフォルムで二層分配して,水溶性および脂溶性画分を調製した.それぞれの画分について,トロンビンに対する阻害活性スクリーニングを行ったところ,海綿46,腔腸12,原索4,および外肛動物1検体に活性を認めた.つぎに,活性の認められた八丈島産海綿Theonella swinhoeiから活性物質の単離を試み,6つの新規活性物質pseudotheonamideA_1,A_2,B_2,C,D,およびdihydrocyclotheonamideAを得た.すなわち海綿サンプルをエタノールで抽出し濃縮後,水とエーテルで二層分配した.水層をさらにブタノールで抽出し,得られたブタノール層を減圧濃縮し,ゲルろ過,ODSフラッシュクロマトグラフィーで順次分画し,最終的に逆相のHPLCを用いて活性物質を精製した.これらの化合物の構造は,MS,NMRなどのスペクトル解析,アミノ酸分析,および化学変換により,絶対立体化学も含めて決定することができた.得られた活性物質はトロンビンに対してIC_<50>0.91〜3.0μMで阻害活性を示した.これらの活性は類縁化合物cyclotheonamideAと比べると1/50以下と弱く,k-Argの構造が活性発現に重要であることを裏付けることができた.また,中之島産海綿Theonella aff.mirabilisからトロンビン阻害物質を単離中,cathepsinBに対して阻害活性を示すペプチドtokaramideAをあわせて単離・構造決定した.TokaramideAはcathepsinBに対してIC_<50>29ng/mLの阻害活性を示した.

Izu Peninsula, Izu Islands, Kyushu Coast, Ryukyu Islands 342 samples of marine invertebrates collected (sponge 239, intestine 78, original rope 18, and outer anus 7 samples) were extracted from 20g of animal sample, and the two-layer distribution of water and lipid solubility was modulated. In addition, the activities of the four species of animals were identified, including sponge 46, coelenteron 12, protoplast 4, and ectoanal animal 1. The active substance is pseudotheonamide A_1, A_2, B_2, C, D, D and D. After the sponge is extracted and concentrated, the water is distributed in two layers. The water layer is pumped out today, and the obtained water layer is reduced in pressure and concentrated. After passing through, the ODS FRANCISCO ROTARY is divided in turn, and the final reverse-phase HPLC is used to refine the active substances. The structure of these compounds is determined by MS,NMR, chemical analysis, acid analysis, and stereochemistry. The inhibition activity of the active substance was shown in the range of <50>IC_0.91 ~ 3.0μM. The structure of cyclotheonamide A is important for the development of cyclotheonamide activity. In addition, Theonella af.mirabilis, a sponge produced in Nakanoshima, shows the inhibition activity of tokaramide A against <50>IC_29 ng/mL in the presence of cathepsinB.