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C型肝炎ウイルスミニゲノムを用いたウイルス複製機構の分子解析

利用丙型肝炎病毒小基因组对病毒复制机制进行分子分析

基本信息

批准号：
10770136
负责人：
田中良和
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770136/
关键词：
C型肝炎ウイルス複製分子生物学

项目摘要

C型肝炎ウイルス(HCV)のNS5B蛋白質がin vitroにおいてRNA依存性RNAポリメラーゼ活性を有することが明らかにされたが、鋳型RNAに対する特異性がないことが報告されている。一方、HCVが極限られた細胞でしか増殖できず、同じ培養細胞を用いてもウイルス株により感染複製効率が異なるということからウイルス複製を制御している細胞側因子およびウイルス側因子が存在することが考えられる。これらウイルス複製制御因子を解析していくことはウィルス持続感染機構および病原性発現機構を明らかにする上で重要である。そこで、ウイルス分子複製機構を解析するためにウイルスの5'UTRと3'X領域の間にレポーター遺伝子(基質の異なる2種類のルシフェラーゼ)をもつミニウイルスゲノムを構築した。このミニウイルスゲノムは(+)鎖および(-)鎖の合成に伴いルシフェラーゼ活性を示した。また、ウイルス蛋白質のどの領域がウイルス複製を担っているのかを明らかにするためにCre/loxP発現システムを利用して各ウイルス蛋白質を培養細胞内で発現させることを試みている。これらのシステムを組み合わせることにより細胞内における本来のウイルス複製、成熟過程に準じた系を再現できウイルス複製効率をレポーター蛋白質の生物学的活性で定量化することが可能となる。今後、ウイルス複製を担うウイルス側および細胞側因子を同定し、ウイルスゲノムとウイルス蛋白質および細胞側因子との相互作用を明らかにすべく研究を進めている。

Hepatitis C virus (HCV) NS5B protein in vitro RNA-dependent RNA protein activity in vitro HCV is the limit of cell proliferation, and the same culture of cells can be used to control the replication rate of HCV infection. It is important to analyze the replication control factors in order to understand the mechanisms of infection and pathogenicity. The molecular replication mechanism is analyzed and constructed in the 5'UTR and 3'X domains. This is the first time that a person's name has been used. The domain of Cre/loxP protein was developed in cultured cells. The biological activity of the protein can be quantified by the replication rate of the protein in the cell. In the future, the study of the interaction between protein and cell side factors will be further developed.