C型肝炎ウイルスミニゲノムを用いたウイルス複製機構の分子解析

C型肝炎ウイルス(HCV)のNS5B蛋白質がin vitroにおいてRNA依存性RNAポリメラーゼ活性を有することが明らかにされたが、鋳型RNAに対する特異性がないことが報告されている。一方、HCVが極限られた細胞でしか増殖できず、同じ培養細胞を用いてもウイルス株により感染複製効率が異なるということからウイルス複製を制御している細胞側因子およびウイルス側因子が存在することが考えられる。これらウイルス複製制御因子を解析していくことはウィルス持続感染機構および病原性発現機構を明らかにする上で重要である。そこで、ウイルス分子複製機構を解析するためにウイルスの5'UTRと3'X領域の間にレポーター遺伝子(基質の異なる2種類のルシフェラーゼ)をもつミニウイルスゲノムを構築した。このミニウイルスゲノムは(+)鎖および(-)鎖の合成に伴いルシフェラーゼ活性を示した。また、ウイルス蛋白質のどの領域がウイルス複製を担っているのかを明らかにするためにCre/loxP発現システムを利用して各ウイルス蛋白質を培養細胞内で発現させることを試みている。これらのシステムを組み合わせることにより細胞内における本来のウイルス複製、成熟過程に準じた系を再現できウイルス複製効率をレポーター蛋白質の生物学的活性で定量化することが可能となる。今後、ウイルス複製を担うウイルス側および細胞側因子を同定し、ウイルスゲノムとウイルス蛋白質および細胞側因子との相互作用を明らかにすべく研究を進めている。

C型肝炎ウイルス(HCV)のNS5B蛋白質がin vitroにおいてRNA依存性RNAポリメラーゼ活性を有することが明らかにされたが、鋳型RNAに対する特異性がないことが報告されている。一方、HCVが極限られた細胞でしか増殖できず、同じ培養細胞を用いてもウイルス株により感染複製効率が異なるということからウイルス複製を制御している細胞側因子およびウイルス側因子が存在することが考えられる。これらウイルス複製制御因子を解析していくことはウィルス持続感染機構および病原性発現機構を明らかにする上で重要である。そこで、ウイルス分子複製機構を解析するためにウイルスの5'UTRと3'X領域の間にレポーター遺伝子(基質の異なる2種類のルシフェラーゼ)をもつミニウイルスゲノムを構築した。このミニウイルスゲノムは(+)鎖および(-)鎖の合成に伴いルシフェラーゼ活性を示した。また、ウイルス蛋白質のどの領域がウイルス複製を担っているのかを明らかにするためにCre/loxP発現システムを利用して各ウイルス蛋白質を培養細胞内で発現させることを試みている。これらのシステムを組み合わせることにより細胞内における本来のウイルス複製、成熟過程に準じた系を再現できウイルス複製効率をレポーター蛋白質の生物学的活性で定量化することが可能となる。今後、ウイルス複製を担うウイルス側および細胞側因子を同定し、ウイルスゲノムとウイルス蛋白質および細胞側因子との相互作用を明らかにすべく研究を進めている。