IL-12の発現調節機構に関する基礎的研究

IL-12表达调控机制的基础研究

• 批准号: 08770228
• 负责人: 善本 隆之
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770228/
• 关键词: IL-12; 発現調節; CD40; NF-κB

IL-12 p40 mRNA発現はCD40L-CD40を介した刺激により誘導されるが、今年度はこのp40発現誘導の分子レベルでの解析を行った。まず、細胞表面上にCD40を強く発現しているヒトのB細胞腫Daudi細胞を、Agonisticな抗CD40抗体で刺激すると、RT-PCRによりmRNAレベルでのp40発現増大と、培養上清中のELISAにより蛋白レベルでの産生が見られた。さらに、この産生はCD32(FcγRII)をトランスフェクトしたL細胞を共存させてAgonisticな抗CD40抗体で刺激すると増大され、またCD40Lの発現ベクターを一過性にトランスフェクトしてもより高いp40産生が見られた。そこでこのDaudi細胞を用い解析を行った。まず、転写開始視点から上流約120bp及び200bpに存在するNF-kB部位(各々#1と#2)を含む約30merのオリゴヌクレオチドを作製し、Agonisticな抗CD40抗体で刺激したDaudi細胞の核抽出物を用いてゲルシフトアッセイを行うと、NF-κB(#1)を含むオリゴヌクレオチドとは結合物の生成が見られたが、NF-κB(#2)とは見られなかった。さらに、このNF-κB(#1)との結合は過剰な非標識オリゴヌクレオチド及びMHC ClassIに存在するAuthenticなNF-κB部位を含むオリゴヌクレオチドにより阻害され、またこのNF-κB(#1)部位に変異を入れたオリゴヌクレオチドでは阻害されないことや、NF-κBに対する種々の抗体を用いた阻害実験によりこの結合生成が特異的であることが明らかとなった。またKinetics解析の結果、この結合は刺激後15分からでも見られた。以上の結果より、p40のプロモーター領域の転写開始点から上流約120bpに存在するNF-κB(#1)がCD40L-CD40を介した刺激によるp40発現誘導に重要であることが示唆された。現在さらに、CATアッセイを用いプロモーター活性での解析を検討中である。

IL-12 p40 mRNA shows that CD40L-CD40 stimulates the target cells, and this year's P40 shows that the molecular markers will be analyzed. On the surface of the cell, the CD40 was strongly expressed. The B cell was Daudi, the Agonistic was stimulated by anti-CD40 antibody, the RT-PCR was stimulated by the mRNA antibody, the p40 was enlarged, and the supernatant was incubated with ELISA protein. Agonistic, anti-CD40 antibody, anti-CD32, anti-CD40, anti-CD32, anti-CD32, anti Use the parse line to parse the Daudi cell. Both 120bp and 200bp exist in the NF-kB region (each # 1 "# 2). They contain 30mer antibodies, anti-CD40 antibodies, stimulation of Daudi cells, nuclear extractions, and NF- kappa B (# 1), which contain a combination of antigens, and antigens. NF- kappa B (# 2). The authentication of NF-κ B, NF-κ B (# 1), NF-κ B, NF-κ B (# 1), NF-κ B (# 1) and so on. NF- κ B anti-tumor antibodies were combined with anti-tumor antibodies to form a specific immune response. After 15 minutes of stimulation, the results of Kinetics analysis were analyzed and the results were analyzed. As a result of the above results, there is an NF-

项目成果

H.Nakano: "Genetic defect in T lymphocyte-specific homing into peripheral lymph nodes." Eur.J.Immunol.(in press). (1996)

H.Nakano：“T 淋巴细胞特异性归巢至外周淋巴结的遗传缺陷。”

H.Nakano: "Deletion of perioheral Vβ14^+ T cells by Mtv-2-encoded viral superantigen preceded by blastogenesis and DNA synthesis but not by specific expansion." Cell.Immunol.168. 281-290 (1996)

H.Nakano：“通过 Mtv-2 编码的病毒超抗原合成删除外周 Vβ14^+ T 细胞，然后进行胚泡发生和 DNA，但不进行特异性扩增。”168（1996）。