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マウスインターロイキン12 (IL-12)の遺伝子構造及びその発現調節機構の解析

小鼠白细胞介素12（IL-12）基因结构分析及其表达调控机制

基本信息

批准号：
07770234
负责人：
善本隆之
金额：
$ 0.51万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770234/
关键词：
IL-12 遺伝子構造プロモーター領域

项目摘要

マウスIL-12p40及びp35のcDNAをプローブに用いマウス(129/Sv)肝臓由来のGenomicライブラリーをスクリーニングした結果、それぞれ全長の遺伝子を含むGenomicクローンを得た。FISH(Fluoresence in situ Hybridization)、PCR、Southern Blot Hybridization、Sequencing等を用いた手法によりそれら遺伝子構造を解析した結果、p40遺伝子は第11染色体5A-B2に位置し約14kbにわたり8つのエキソンと7つのイントロンからなり、また、p35遺伝子は第6染色体Cに位置し約8kbにわたり7つのエキソンと6つのイントロンからなることが明らかとなった。Primer Extention法を用いた解析により、p40の5'上流領域には転写開始点が1つ存在しさらに上流にはTATA及びCAAT Boxがあるが、p35の5'上流領域には複数の転写開始点が存在しTATA Boxはなく、両者のプロモーター領域はかなり異なることが示され、これらの違いがそれぞれの発現様式の違いを裏付けることが示唆された。さらに、各々のプロモーター領域のCAT (Chloramphenycol Acetyltansferase) Constructを作製し、p40の場合はマウスマクロファージ様細胞RAW264にトランスフェクト後LPSで刺激し、p35の場合はマウスBリンパ腫瘍細胞A20.2JにトランスフェクトしCAT活性を測定することにより、プロモーター活性を有することを確かめた。

The cDNA of IL-12p40 and p35 was extracted from the genome by PCR. The cDNA of IL-12 p40 and p35 was extracted from the genome by PCR. FISH (Fluorescence in situ Hybridization), PCR, Southern Blot Hybridization, Sequencing, etc. Use the middle method to analyze the structure of the gene, the p40 gene to the position of chromosome 11 5A-B2, about 14kb, 8 7 The p35 gene is located at the C position of chromosome 6, about 8kb. Primer Extension method is used to analyze the existence of multiple writing start points in the 5'upper field of p40 and the existence of multiple writing start points in the 5' upper field of p35 and the existence of multiple writing start points in the 5'upper field of p40 and the existence of multiple writing start points in the 5' upper field of p35. CAT (Chloramphenicol Acetyltransferase) Construct in each of the three domains was controlled at p40 and stimulated by LPS in RAW264 cells at p35 and CAT activity was measured in RAW20.2J cells at p35.