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Th1反応における情報伝達制御機構の解明-IL-12Rを介したIFN-γ産生へのシグナル伝達-

阐明Th1反应中的信息转导控制机制 - 通过IL-12R信号转导至IFN-γ的产生 -

基本信息

批准号：
12051210
负责人：
善本隆之
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Tokyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12051210/
关键词：
IL-12 Rceptor CD28 CTLA-4 IFN-γ Two-Hybrid Screening Retroviral Expression Cloning B7-1 2

项目摘要

ヒトIL-12Rβ1およびβ2細胞内領域をBaitとしLexAのTwo-Hybrid法でスクリーニングを試みたがポジティブクローンが得られなかった。そこで、マウスIL-12Rβ1およびβ2細胞内領域をBaitとしGAL4のTwo-Hybrid法を用いマウスT細胞リンパ腫瘍株(V13)由来cDNAライブラリーをスクリーニングしたところ、未知の分子を含む複数個のポジティブクローンが得られた。現在、得られて遺伝子を培養細胞株へトランスフェクトし、IL-12Rβ1およびβ2への会合やIL-12Rを介したシグナル伝達における役割を検討中である。レトロウイルスベクターを用いた発現クローニングでは、IFN-γのGenomic遺伝子のATGの後にピューロマイシン抵抗性遺伝子を挿入したプラスミドを構築しトランスフェクタントを作製したが、薬剤耐性による選択でIFN-γ発現誘導が識別できなかった。そこで、GFP遺伝子を挿入したプラスミドを構築しT細胞株のトランスフェクタントを作製し、IFN-γ発現誘導をGFPの蛍光強度の増大で見られる系を確立した。現在、レトロウイルスライブラリー感染後、蛍光強度が増大する細胞をFACSにより分集し導入された遺伝子を解析中である。B7-1/2のT細胞側のCounterpartであるCD28/CTLA-4のIL-12R発現増強への関与を解析した結果、機能的IL-12Rの発現にはCD28からの刺激はポジティブにCTLA-4からの刺激はネガティブに働くこと、さらにIFN-γKOマウスを用いても同様な効果が見られることを示し、IL-12R発現におけるB7-1/2-CD28/CTLA-4刺激の重要性を明らかにした。さらに、CTLA-4からの刺激はナイーブT細胞のTh1への分化を増強すること、この際IL-12の関与は少なくTGF-βを部分的に介しいることも明らかにした。

IL-12Rβ1-β2 Cellular Domain Bait and LexA's Two-Hybrid Method IL-12R β1 and β2 intracellular domains were identified by the Two-Hybrid method of GAL4. The T cell clone (V13) was derived from a cDNA fragment containing a plurality of unknown molecules. Now, we have obtained the results of cell culture, IL-12R β1 and IL-12R β2 fusion and IL-12R β1 and IL-12R β 2 fusion. The gene expression of IFN-γ was detected in the middle of the gene expression system. The gene expression system of IFN-γ was constructed to control the gene expression system. The gene expression system of IFN-γ was selected to induce the gene expression system. We established the system for the induction of GFP gene expression and the enhancement of GFP fluorescence intensity in T cell lines. Now, after infection, the light intensity increases, and the cells are analyzed in FACS. B7- 12 T cell side of the Counterpart of CD28/CTLA-4 IL-12R production enhancement and analysis of results, functional IL-12R production in response to CD28 stimulation of the Counterpart of CTLA-4 stimulation of the Counterpart of IFN-γKO production in the same way The importance of B7- 12-CD28/CTLA-4 stimulation in the development of IL-12R has become clear. In addition, CTLA-4 stimulation increases the differentiation of T cells, which is mediated by IL-12 and TGF-β.