炎症細胞浸潤を媒介する接着分子P-セレクチンの新規機能ドメインの解析

介导炎症细胞浸润的粘附分子 P-选择素的新功能域分析

• 批准号: 10771288
• 负责人: 川島 博人
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10771288/
• 关键词: P-セレクチン; PSGL-1; 白血球浸潤; 炎症; モノクローナル抗体; シアリルルイスX; リガンド; 白血球

活性化血管内皮細胞および活性化血小板に発現するP-セレクチンの特異的なリガンドとして、白血球上に発現するムチン様糖タンパク質P-selectin glycoprotein ligand-1(PSGL-1)が知られている。最近の報告によると、PSGL-1のN末端近傍がシアリルルイスX様糖鎖修飾およびチロシン残基の硫酸化修飾を受けており、この2つの修飾が同時に存在することで、P-セレクチンとの結合に高い親和性をもたらしていると考えられている。われわれは、抗ラットP-セレクチンモノクローナル抗体を作製し、PSGL-1との結合に関与するP-セレクチン上の機能的部位の解析を試みた。その結果、P-セレクチンとPSGL-1との結合は阻害するがシアリルルイスXとの結合は阻害しないユニークなモノクローナル抗体C215を樹立し、この抗体がP-セレクチン上の8アミノ酸よりなるWADNEPNNという配列を認識することを明らかにした。さらに、この8アミノ酸よりなる合成ペプチドがP-セレクチンとPSGL-1の結合を特異的に阻害すること、およびシアリルルイスX糖鎖非依存的にPSGL-1遺伝子導入細胞と結合することを明らかにした。これまで、シアリルルイスX糖鎖結合ドメインのみがP-セレクチン上の機能ドメインと考えられてきた。しかし、以上の結果より、P-セレクチン上のアミノ酸76から83番のWADNEPNNがPSGL-1の認識に関与する新規機能エピトープである可能性が示唆された。

Activity of vascular endothelial cells お よ び activeness platelet に 発 now す る P - セ レ ク チ ン の specific な リ ガ ン ド と し て, white blood cells on に 発 now す る ム チ ン others in sugar タ ン パ ク qualitative P - selectin glycoprotein ligand 1 (PSGL - 1) が know ら れ て い る. Recently の report に よ る と, の PSGL - 1 N terminal near alongside が シ ア リ ル ル イ ス X others in sugar lock modified お よ び チ ロ シ ン residues の sulphation modification を by け て お り, こ の 2 つ の modified が に exist at the same time す る こ と で, P - セ レ ク チ ン と の combined with high に い affinity を も た ら し て い る と exam え ら れ て い る. わ れ わ れ は, resisting ラ ッ ト P - セ レ ク チ ン モ ノ ク ロ ー ナ ル し, PSGL - 1 the antibody を cropping と の combining に masato and す る P - セ レ ク チ ン の function on the part of the analytical を try み の た. そ の results, P - セ レ ク チ ン と PSGL - 1 と の combining は resistance against す る が シ ア リ ル ル イ ス X と の combining は resistance against し な い ユ ニ ー ク な モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody C215 を し, こ の antibody が P - セ レ ク チ ン の on 8 ア ミ ノ acid よ り な る WADNEPNN と い う match column を know す る こ と を Ming ら か に し た . さ ら に, こ の 8 ア ミ ノ acid よ り な る synthetic ペ プ チ ド が P - セ レ ク チ ン と の combining を PSGL - 1 specific に resistance against す る こ と, お よ び シ ア リ ル ル イ ス X sugar lock of interdependent に PSGL - 1 heritage 伝 import cells と combining す る こ と を Ming ら か に し た. こ れ ま で, シ ア リ ル ル イ ス X lock combining sugar ド メ イ ン の み が P - セ レ ク チ ン の function on ド メ イ ン と exam え ら れ て き た. し か し, the results of the above の よ り, P - セ レ ク チ ン on の ア ミ ノ acid 76 か ら 83 times の WADNEPNN が の PSGL - 1 know に masato and す る new rules function エ ピ ト ー プ で あ が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

Hirose,M.et al.: "A functional epitope on P-selectin that supports binding of P-selectin to P-selestin glycoprotein ligand-I put not to sialyl Lewis X oligosaccharides." International Immunology. 10. 639-649 (1998)

Hirose,M.et al.：“P-选择素上的功能性表位，支持 P-选择素与 P-selestin 糖蛋白配体的结合，但我不将其与唾液酸路易斯 X 寡糖结合。”

Mayumi Hirose: "A functional epitope on P-selectin that supports binding of P-selectin to P-selectin glycoprotein ligand-1 but not to sialyl Lewis X oligosaccharides"International Immunology. 10. 639-649 (1998)

Mayumi Hirose：“P-选择素上的功能性表位，支持 P-选择素与 P-选择素糖蛋白配体 1 结合，但不与唾液酸路易斯 X 寡糖结合”国际免疫学。

Hiroto Kawashima: "Identification and characterization of Ligands for L-selectin in the kidney. I. Versican, a large chondroitin sulfate proteoglycan, is a ligand for L-selectin,"International Immunology. 11. 393-405 (1999)

Hiroto Kawashima：“肾脏中 L-选择素配体的鉴定和表征。I. Versican，一种大型硫酸软骨素蛋白聚糖，是 L-选择素的配体，”国际免疫学。

Hiroto Kawashima: "Vascular and non-vascular ligands for L-selectin"Cell Adhesion and Communication. 6. 135-139 (1998)

Hiroto Kawashima：“L-选择素的血管和非血管配体”细胞粘附和通讯。

Yong-Fei Li: "Identification and characterization of ligands for L-selectin in the kideny. II Expression of chondroitin sulfate and heparan sulfate proteoglycans reactive with L-selection"FEBS Letters. 444. 201-205 (1999)

李永飞：“肾脏中L-选择素配体的鉴定和表征。II 与L-选择反应的硫酸软骨素和硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的表达”FEBS Letters。