糖鎖を認識する白血球接着分子L-セレクチンの新しいリガンドの同定

L-选择素的新配体的鉴定，L-选择素是一种识别糖链的白细胞粘附分子

• 批准号: 06770253
• 负责人: 川島 博人
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770253/
• 关键词: 接着分子; L-セレクチン; リンパ球ホ-ミング

生体内におけるリンパ球のホ-ミング現象は免疫系が秩序正しく機能を発揮するために必須の役割をしており、その特異性の少なくとも一部は白血球上の接着分子L-セレクチン(LECAM-1)が血管内皮細胞上の特定のリガンド分子と結合することにより担われる。私はラットL-セレクチンの細胞外ドメインとヒトIgG_1の定常領域ドメインを遺伝子操作によってつないだキメラ分子(LEC-IgG)をプローブとしてラットリンパ節におけるリガンドの解析を行った。はじめに、リンパ節の組織片のNP-40による可溶化物をWGA-カラムおよびLEC-IgG-カラムに順次かけ精製を進めた。得られた精製画分のSDS-PAGEの結果、160 kDaにほぼ単一なバンドが認められた。約100mgの精製の出発材料から2mgの精製標品が得られた。この分子はその分子量からこれまでに報告のない新たなL-セレクチンのリガンドであるものと考えられた。次に、この160kDaのリガンド分子をNa^<125>Iにより標識した後にL-セレクチンとの反応性を検討した。その結果、^<125>I-標識物はヒトIgG-ビーズには反応せずLEC-IgG-ビーズにのみ反応することよりL-セレクチンに特異的に結合するものと考えられた。また、EDTAおよびL-セレクチンのレクチンドメインに反応する中和抗体HRL1およびHRL3存在下においてL-セレクチンとの反応が阻害されることよりL-セレクチンのレクチンドメインを介して認識されるもの考えられた。非中和抗体HRL2およびHRL4はこのリガンド分子とL-セレクチンとの結合に影響を及ぼさなかった。また、L-セレクチンに結合することの知られているfucoi danやPPMEなどの多糖やsulfatideもこの分子のL-セレクチンとの結合を阻害した。また、このリガンド分子に糖鎖修飾を施した後にL-セレクチンとの反応性を検討したところ、N-グリカナーゼ消化ではわずかに反応性が弱くなるもののほとんど影響しなかったがO-結合型、N-結合型いずれの糖鎖をも切り出すことの知られているTFMS処理により、L-セレクチンとの反応性は完全に消失した。このことより、この分子上のO-結合型糖鎖がL-セレクチンとの結合に重要であるものと考えられた。今後この160kDaのリガンド分子の大量精製を行い、部分アミノ酸配列の決定およびcDNAクローニングを行いたいと考えている。

In vivo, this phenomenon is responsible for the regulation and functioning of the immune system, including the binding of L-protein (LECAM-1) on leukocytes and specific molecules on vascular endothelial cells. The extracellular matrix of L-IgG and IgG_1 in the steady state domain were analyzed by molecular manipulation of LEC-IgG. The solubilized substance of NP-40 in tissue slices was purified by WGA-1 and LEC-IgG-1 in sequence. SDS-PAGE results of purified samples were obtained, and the 160 kDa protein was identified. About 100mg of refined emission material was obtained from 2mg of refined standard. The number of sub-units is not equal to the number of sub-units reported. In addition, the 160kDa protein molecule was identified and then <125>the L-protein was identified. The results showed that the <125>I-labeled antibody could bind to the LEC-IgG-specific antibody. The presence of neutralizing antibodies HRL1 and HRL3 in the presence of EDTA, EDTA and L-crackers in the presence of neutralizing antibodies HRL1 and HRL3 in the presence of neutralizing antibodies HRL3 in the presence of EDTA, EDTA and L-crackers in the presence of neutralizing antibodies HRL3 in the presence of neutralizing antibodies Non-neutralizing antibodies HRL2 and HRL4 have the effect of binding to L-linked molecules. The binding of PPME and PPME to the L-peptide is inhibited. After the application of the sugar lock modification, the L-chain reaction and the antigenicity of the TFMS treatment completely disappeared. O-linked sugar chains on the molecules of these molecules are important for their binding. In the future, a large number of purification of 160kDa protein molecules will be carried out, and some of them will be determined by DNA sequencing.

项目成果

Miyasaka,M.and Kawashima,H.: "Expression of L-Selectin(LECAM-1)ligands in the Kidney." Current Topics in Mucosal Immunology. 367-371 (1994)

Miyasaka,M. 和 Kawashima,H.：“L-选择素 (LECAM-1) 配体在肾脏中的表达”。