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クロマチンDNAにおける相同的組換え機構に関する研究

染色质DNA同源重组机制研究

基本信息

批准号：
10780433
负责人：
胡桃坂仁志
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

真核生物の染色体は、クロマチン構造を形成して造伝子DNAを狭い核内に収容している。この核内で、遺伝子DNAは種々の原因による損傷を受ける。そのため生物には複数のDNA修復機構が存在している。その内の一つに、相同的組換えを介したDNA修復機構がある。クロマチンDNAでの相同的組換えを理解するためには、そこで働くDNA組換え酵素を同定する必要がある。近年、ハムスターのDNA修復欠損細胞を相補するヒトの遺伝子として、XRCC2およびXRCC3遺伝子が単離された。そしてこれらの遺伝子産物が、ヒトの組換え酵素として知られているHsRad51と低い相同性を有することが明らかになった。さらに、HsRad51遺伝子と相同性を有するヒトの遺伝子として、Rad51B、Rad51C、Rad51Dがデータベースより見いだされ、これらRad51ファミリーの相同的組換え修復系への関与が示唆された。そこで、本研究において、これらRad51ファミリーのうち、特にXrcc2、Xrcc3、Rad51C、そしてHsRad51の遺伝子産物を組換え蛋白質として精製して生化学的な解析を行った。その結果、Xrcc3は単独では可溶性画分に見られないが、HsRad51もしくはRad51Cと共発現させると、これらと複合体を形成して可溶性になることが分かった。そして、Xrcc3・Rad51C複合体が単鎖DNAおよび二重鎖DNAと結合し、HsRad51同様にnucleoprotein filament構造を形成すること、HsRad51と同様に相同な単鎖DNAと二重鎖DNAとを対合させる相同的対合反応を行うことが明らかになった。一方、Xrcc2は単独で可溶性画分に精製されるが、それ自身では相同的対合反応は行わなかった。

The chromosome structure of eukaryotes is formed and the DNA of eukaryotes is contained in the nucleus. The reason for this is that the DNA in the nucleus is damaged. A number of DNA repair mechanisms exist in organisms. The DNA repair mechanism is the same as the DNA repair mechanism. The same DNA sequence is necessary for understanding. In recent years, the DNA repair of defective cells has been complemented by the development of XRCC2 and XRCC3 genes. HsRad51 and HsRad51 are identical to each other. In addition, the HsRad51 gene has the same identity as the Rad 51 gene, and the Rad51B, Rad51C, and Rad 51D have the same identity as the Rad51 gene. In this study, we conducted biochemical analysis of protein composition and purification of protein products derived from Rad51, Xrcc2, Xrcc3, Rad51C, and Rad 51. As a result, Xrcc3 was isolated from the soluble fraction, HsRad 51 was isolated from the soluble fraction, and HsRad 51 was isolated from the soluble fraction. Xrcc3·Rad51C complex is composed of single and double lock DNA, HsRad 51 and nucleoprotein filament structure. Xrcc2 is the only soluble protein that can be purified by itself and is the same as Xrcc 2.