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ヒトDNA組換え修復装置による発がん防御の分子機構の解析

人体DNA重组修复仪防癌分子机制分析

基本信息

批准号：
14026060
负责人：
胡桃坂仁志
金额：
$ 2.5万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

染色体DNAが放射線や抗がん剤などによって受ける二重鎖DNA切断は、相同組換えを経由して速やかに修復される。この相同組換え機構の欠損が癌化の直接の原因となることが、近年報告されている。相同組換えの過程で、二重鎖切断を受けたDNA部位は、無傷の染色体DNAの中から相同な配列を探し出して対合する。この過程を相同的対合反応という。これまでに我々は、真核生物においてバクテリアRecAのホモログであるRad51とDmc1に加えて、ヒトRad52が、Rad51非存在下で相同的対合反応を触媒することを見出した。今回、Rad52の相同的対合反応触媒ドメインの高次構造を、X線結晶構造解析により決定した。その結果、ヒトRad52の相同的対合ドメインであるRad52_<1-212>は、11分子集まって安定なリング構造を形成することが分かった。次に、Rad52_<1-212>の表面電荷よりDNA結合領域を予想した。そしてその領域に存在するLys、Arg、およびTyr残基をそれぞれアラニンに置換した変異体を作成し、これらのDNA結合活性を調べた。そして、単鎖および二重鎖DNA結合にそれぞれ重要な残基が、予想されたDNA結合領域に局在することが明らかになった。さらに興味深いことに、分析超遠心法によって、全長のRad52は、Rad52_<1-212>とは異なり7量体のリング構造を形成することが明らかになった。この7量体リングは、Rad52_<1-212>の11量体リングと電子顕微鏡下では区別できないほど似ていた。そこで、Rad52_<1-212>の立体構造を用いて7量体リング構造のモデルを構築したところ、Rad52のC末端領域がモノマー間の領域の形成に関与することが予想された。これらの結果から、Rad52_<1-212>の11量体リング構造は、Rad52よりむしろRad52のN末端側と高い相同性を示す酵母のRad59や、N末端領域の約200アミノ酸からなるヒトRad52のsplicing variantの立体構造を反映していると結論された。そして、Rad52のホモログの間で、7量体と11量体の2種類のリング構造が存在することが明らかになった。

Chromosomal DNA radioactivity was detected by double DNA transection, and the same tissue was repaired by rapid repair. The same organization is not responsible for the direct cause of cancerization, and it has been reported in recent years. In the same tissue, double transection of the recipient DNA site, and detection of the same sequence in the anisomal chromosome DNA, we found that there was a combination of DNA in the same tissue. If the process is the same, it will be the same. Eukaryotes, RecA, Dmc1, Rad52, Rad51 are the same as those in the presence of the same catalyst. This time, Rad52 has the same anti-catalyst for high-quality production and X-ray analysis. The results showed that the molecular set of RAD52 _ & lt;1-212gt; and 11 molecular sets were constructed with the same result and Rad52. Sub-standard, Rad52_<1-212 g t; surface charge measurement DNA combined with field imaginable. There are Lys, Arg, and Tyr residues in the field where there is a combination of DNA and bioactivity. The double DNA is used in combination with the critical residues of the DNA, and the field bureau is expected to know how to do it. The quality of the product is very deep, the analytical method is accurate, the full-length Rad52 is full-length, Rad52_<1-212g, and the volume is measured to form an accurate measurement. 7, Rad52_<1-212, and 11, respectively, under the microphone of the computer. Three-dimensional equipment, Rad52_<1-212 GT; Stereoscopic equipment is built with 7-dimensional measurement. The field of the C-terminal terminal of the Rad52 is the same as that of the C-terminal. The results were as follows: Rad52_<1-212g, Rad52-212g,-212g, Rad59, Rad59 and splicing variant. There are some problems in the system, such as, Rad52, 7, 11, 2 and so on.