新規NKレセプターの遺伝子クローニングと会合分子の解析

新型NK受体基因克隆及相关分子分析

基本信息

批准号：
11770176
负责人：
反町典子
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究はNK細胞の標的認識に関わる新規レセプターの遺伝子クローニングと会合分子の解析を目的として行った。これまでに、幾つかの異なるアプローチからNKレセプターの同定を試みた。(1)NK細胞の細胞傷害活性に影響を与える新規モノクローナル抗体の解析:NK細胞の細胞傷害活性に影響を与える新規モノクローナル抗体の性状解析を行い、その抗体がマウスCD94を認識することを明らかにした。新規に得られた抗CD94抗体を用いて、CD94が全てのNKおよびNKT細胞に発現すること、NKおよびNKT細胞はCD94強陽性とCD94弱陽性細胞の2種類の細胞亜集団からなること、マウスCD94は標的細胞上のQa-1分子を認識して細胞傷害活性を抑制する、抑制性レセプターとして機能すること、マウスNK細胞の自己寛容にはCD94/NKG2ファミリーとLy-49ファミリーの2種類の抑制性レセプターからのシグナルが必須であることを明らかにした。(2)未熟NK細胞に発現するレセプターの検索:NK細胞の分化に関わるレセプターを明らかにすることを最終目的として、未熟NK細胞上のNKレセプターの検索を行った。未熟NK細胞を免疫し、モノクローナル抗体を作製し、発現分布、NK細胞に与える影響などからいくつかのモノクローナル抗体を選別した。(3)NKレセプターの一次構造上の相同性に基づくPCRクローニング:Ly-49ファミリーでよく保存されている配列をもとに、PCRクローニングを行い、新規Ly-49分子としてLy-49Qを同定した。Ly-49Qは細胞内領域にITIMモチーフを有し、ホモダイマーを形成して膜表面に発現しうることを示した。

进行这项研究的目的是基因克隆NK细胞中参与靶标识别的新受体和相关分子的分析。迄今为止，我们试图从几种不同的方法中识别NK受体。（1）分析影响NK细胞细胞毒性活性的新型单克隆抗体：我们对影响NK细胞细胞毒性活性的新型单克隆抗体的性质进行了分析，并揭示了抗体识别小鼠CD94。 Using the newly obtained anti-CD94 antibody, we revealed that CD94 is expressed in all NK and NKT cells, that NK and NKT cells consist of two cell subpopulations: strong CD94 positive and weak CD94 positive cells, that mouse CD94 recognizes Qa-1 molecules on target cells to suppress cytotoxic activity, that function as an inhibitory receptor, and that signals from two inhibitory receptors, the CD94/NKG2家族和LY-49家族对于小鼠NK细胞的自我耐受至关重要。（2）搜索在未成熟的NK细胞中表达的受体：我们在未成熟的NK细胞上搜索了NK受体，其最终目标是阐明与NK细胞分化有关的受体。对未成熟的NK细胞免疫以产生单克隆抗体，并根据表达的分布和对NK细胞的影响选择了几种单克隆抗体。（3）基于NK受体的一级结构同源性的PCR克隆：基于在LY-49家族中保守的序列进行PCR克隆，LY-49Q被确定为新型LY-49分子。 LY-49Q在细胞内区域具有ITIM基序，表明它可以形成同型二聚体并在膜表面表达。