新規NKレセプターの遺伝子クローニングと会合分子の解析

新型NK受体基因克隆及相关分子分析

基本信息

项目摘要

本研究はNK細胞の標的認識に関わる新規レセプターの遺伝子クローニングと会合分子の解析を目的として行った。これまでに、幾つかの異なるアプローチからNKレセプターの同定を試みた。(1)NK細胞の細胞傷害活性に影響を与える新規モノクローナル抗体の解析:NK細胞の細胞傷害活性に影響を与える新規モノクローナル抗体の性状解析を行い、その抗体がマウスCD94を認識することを明らかにした。新規に得られた抗CD94抗体を用いて、CD94が全てのNKおよびNKT細胞に発現すること、NKおよびNKT細胞はCD94強陽性とCD94弱陽性細胞の2種類の細胞亜集団からなること、マウスCD94は標的細胞上のQa-1分子を認識して細胞傷害活性を抑制する、抑制性レセプターとして機能すること、マウスNK細胞の自己寛容にはCD94/NKG2ファミリーとLy-49ファミリーの2種類の抑制性レセプターからのシグナルが必須であることを明らかにした。(2)未熟NK細胞に発現するレセプターの検索:NK細胞の分化に関わるレセプターを明らかにすることを最終目的として、未熟NK細胞上のNKレセプターの検索を行った。未熟NK細胞を免疫し、モノクローナル抗体を作製し、発現分布、NK細胞に与える影響などからいくつかのモノクローナル抗体を選別した。(3)NKレセプターの一次構造上の相同性に基づくPCRクローニング:Ly-49ファミリーでよく保存されている配列をもとに、PCRクローニングを行い、新規Ly-49分子としてLy-49Qを同定した。Ly-49Qは細胞内領域にITIMモチーフを有し、ホモダイマーを形成して膜表面に発現しうることを示した。
This study は NK cells の mark know に masato わ る new rules レ セ プ タ ー の heritage 伝 son ク ロ ー ニ ン グ meet と molecular の を purpose と し て line っ た. Youdaoplaceholder6 れまでに, several れまでに <s:1> are different from なるアプロ チ チ ら らNKレセプタ <e:1> みた the same を test みた. (1) に の cell damage of NK cells activity を and え る new rules モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody の analytic: に の cell damage of NK cells activity を and え る new rules モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody の character line analytical を い and そ の antibody が マ ウ ス CD94 を know す る こ と を Ming ら か に し た. New rules に have ら れ た CD94 antibody を resistance with い て, CD94 が full て の NK お よ び NKT cells に 発 now す る こ と, NK お よ び NKT cells は CD94 strong positive と CD94 weakly positive cells の 2 kinds の 亜 set 団 か ら な る こ と, マ ウ ス CD94 は target cells recognize molecules を の Qa - 1 し て cell damage Sexual を inhibit す る, inhibitory レ セ プ タ ー と し て function す る こ と, マ ウ ス NK cells の oneself understanding let に は CD94 / NKG2 フ ァ ミ リ ー と Ly - 49 フ ァ ミ リ ー の 2 kinds の inhibitory レ セ プ タ ー か ら の シ グ ナ ル が must で あ る こ と を Ming ら か に し た. (2) the unripe NK cells に 発 now す る レ セ プ タ ー の 検 suo: NK cells の に masato わ る レ セ プ タ ー を Ming ら か に す る こ と を final purpose と し て, unripe の on NK cells NK レ セ プ タ ー の 検 cable line を っ た. Unripe NK cells を immune し, モ ノ ク ロ ー ナ ル し, the antibody を cropping 発 に distribution, NK cells and え る influence な ど か ら い く つ か の モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody を choose don't し た. (3) NK レ セ プ タ ー の の on a tectonic facies gay に base づ く PCR ク ロ ー ニ ン グ : Ly - 49 フ ァ ミ リ ー で よ く save さ れ て い る match column を も と に, PCR ク ロ ー ニ ン グ を い, new rules on Ly - 49 molecular と し て Ly - 49 q を with fixed し た. Ly - 49 q は intracellular domain に ITIM モ チ ー フ を し, ホ モ ダ イ マ ー を form し て membrane surface に 発 now し う る こ と を shown し た.

项目成果

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Tagawa,K., et al.: "Myopathy phenotype of transgenic mice expressing active site-mutated inactive p94 skeletal muscle-specific calpain, the gene product responsible for limb girdle muscular dystrophy type 2A."Human Mol.Genet.. 9. 1393-1402 (2000)
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Endo,J., et al.: "Deficiency of a STE20/PAK family kinase LOK leads to the acceleration of LFA-1 clustering and cell adhesion of activated lymphocytes."FEBS Letters. 468. 234-238 (2000)
Endo,J. 等人:“STE20/PAK 家族激酶 LOK 的缺陷会导致 LFA-1 聚集和活化淋巴细胞的细胞粘附加速。”FEBS Letters。
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Toyama-Sorimachi,N., et al.: "Mouse CD94 participates in Qa-1-mediated self recognition by NK cells and delivers inhibitory signals independent of Ly-49."J.Immunol.. (In press).
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