NK細胞の標的認識に関与する新規C型レクチンの同定とその機能解析

一种参与NK细胞靶标识别的新型C型凝集素的鉴定及其功能分析

基本信息

批准号：
12033223
负责人：
反町典子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究はNK細胞の標的認識に関わる新規C型レクチンの同定とその機能解析を目的として行った。これまでに、異なる2種類のアプローチを行い、それぞれのアプローチからC型レクチンの同定に成功した。(1)新規NKレセプターに対するモノクローナル抗体の樹立:これまでにNK細胞に対する種々のモノクローナル抗体を作製し、発現分布、NK細胞傷害活性に与える影響から、新規分子を認識すると考えられる抗体を選別し、その中の一つがC型レクチンファミリーに属するNKレセプターであるCD94を認識することを明らかにした。新規に得られた抗CD94抗体を用いて、CD94が全てのNKおよびNKT細胞に発現すること、NKおよびNKT細胞はCD94強陽性とCD94弱陽性細胞の2種類の細胞亜集団からなることを見いだした。さらに、マウスCD94は標的細胞上のQa-1分子を認識して細胞傷害活性を抑制する、抑制性レセプターとして機能することを明らかにした。(2)C型レクチンファミリーの一次構造上の相同性を利用したPCRクローニング:NK細胞の分化調節機構を明らかにすることを最終目的として、未熟NK細胞上のNKレセプターの検索を行った。C型レクチンファミリーであるLy-49分子の保存されている配列をもとにPCRクローニングを行った結果、新規のLy-49としてLy-49Qを同定した。Ly-49Qはラットで同定されているC型レクチンに高い相同性を示し、細胞内領域にITIM配列を持つことから、抑制性レセプターとして機能することが推察された。遺伝子導入実験からLy-49Qはホモダイマーとして細胞表面に発現しうることを示した。さらにLy-49Q遺伝子導入株を抗原として、抗Ly-49Qモノクローナル抗体を作製した。現在得られた抗体の特異性(他のLy-49分子に対する交差反応も含む)について検討をすすめ、さらにモノクローナル抗体を用いてLy-49Qの発現分布とその機能解析を進めている。

进行这项研究的目的是鉴定参与NK细胞靶标识别的新型C型凝集素并分析其功能分析。到目前为止，我们已经采用了两种不同的方法，并从每种方法中成功识别了C型凝集素。（1）建立针对新型NK受体的单克隆抗体：我们以前已经生产了针对NK细胞的各种单克隆抗体，并选择了被认为根据其对表达分布和NK细胞损伤活性的影响识别新分子的抗体，并且其中一个识别cd94 cd94 cd94，cd94识别CD94，属于CD94，属于CD94。使用新获得的抗CD94抗体，我们发现CD94在所有NK和NKT细胞上都表达，并且NK和NKT细胞由两个细胞亚群组成：CD94呈阳性阳性和CD94细胞细胞。此外，揭示了小鼠CD94充当抑制性受体，它识别靶细胞上的QA-1分子并抑制细胞毒性活性。（2）利用C型凝集素家族的主要结构同源性的PCR克隆：我们在未成熟的NK细胞上搜索了NK受体，其最终目的是阐明NK细胞分化调节的机理。基于C型凝集素家族LY-49的保守序列进行PCR克隆，LY-49Q被确定为新颖的LY-49。 LY-49Q与在大鼠中鉴定的C型凝集素表现出高的同源性，并在细胞内区域具有ITIM序列，这表明它起作用充当抑制受体。基因转移实验表明，LY-49Q可以在细胞表面以均二聚体的形式表达。此外，使用LY-49Q转基因菌株作为抗原制备抗LY-49Q单克隆抗体。我们现在正在研究获得的抗体的特异性（包括与其他LY-49分子的交叉反应），此外，我们正在使用LY-49Q的表达分布及其使用单克隆抗体的功能分析。