NK細胞の標的認識に関わる新規細胞表面分子の同定とその機能解析

参与NK细胞靶标识别的新型细胞表面分子的鉴定及其功能分析

基本信息

批准号：
11140285
负责人：
反町典子
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

NK細胞は抗原の感作なしに腫瘍細胞やウイルス感染細胞を殺傷することのできるリンパ球集団で、免疫監視機能に重要な役割を果たしていると考えられている。本研究では、NK細胞の標的認識に関与する新規レセプター群の同定を目的として研究を行った。(1)NK細胞分化の初期に選択的に発現する新規Ly-49の遺伝子クローニングとその性状解析:胎児肝臓内NK細胞におけるNKレセプターの発現を解析する過程で、胎児肝細胞内NK細胞にLy-49様分子が発現することを見いだした。この分子の性状およびNK細胞における機能を明らかにするために、胎児肝NK細胞に発現するLy-49分子群の遺伝子クローニングを試みた。その結果、Ly-49ファミリーに属する新規メンバーを同定し、Ly-49Qと命名した。Ly-49Qは細胞内領域にITIMモチーフを有することから、抑制性レセプターとして機能することが示唆された。半定量的PCR解析の結果、Ly-49QのmRNAは出生までに次第に減少し、成熟NK細胞においてはその発現量は極めて少なくなる。これは、生後に発現が始まる既知のLy-49分子とは異なるユニークな動態である。このことから、Ly-49Qは胎児肝臓内でのNK細胞の分化あるいは妊娠期間中の母子相互作用に何らかの役割を果たしている可能性が考えられる。現在その機能解析のために、特異的モノクローナル抗体の作成、認識分子の同定を進めている。(2)マウスCD94の発現と機能解析:NKおよびNKT細胞に特異的に反応し、NK細胞の細胞障害活性を修飾する抗体Yuri3の性状解析を行い、認識分子を同定した。その結果、Yuri3抗体はマウスCD94を認識することが明らかになった。CD94は、NK、NKT細胞および一部のCD8陽性T細胞に発現し、成熟NK細胞はCD94強陽性細胞とCD94弱陽性細胞の2集団に分類された。MHCクラスI欠損マウスにおいてはCD94強陽性細胞分画が増加することから、CD94がMHCクラスI分子によって発現調節を受ける可能性が示唆された。遺伝子導入によって作成したトランスフェクタントを用いた解析から、マウスCD94は単独およびNKG2との複合体としても細胞表面に発現し、Yuri3抗体はその両者を認識しうることが明らかとなった。Yuri3抗体存在下では、syngeneicおよびallogeneic由来の標的細胞いずれに対してもNK細胞の細胞障害活性を増強した。このことから、複合体を形成するNKG2の種類によって、CD94は活性化シグナルと抑制性シグナルのいずれもが伝達される可能性は示唆され、現在シグナル伝達経路の解析も進めている。

NK细胞是淋巴细胞群体，可以杀死肿瘤细胞和感染病毒的细胞而无需抗原敏化，并被认为在免疫监测功能中起重要作用。在这项研究中，我们进行了一项研究，目的是识别一组参与NK细胞靶标识别的新型受体。（1）在NK细胞分化的早期阶段选择性表达的新型LY-49的基因克隆和表征：在分析胎儿肝NK细胞中NK受体表达的过程中，我们发现LY-49样分子在胎儿肝NK细胞中表达。为了阐明该分子及其在NK细胞中的功能的特性，我们试图克隆在胎儿肝NK细胞中表达的LY-49分子的基因。结果，确定了属于LY-49家族的新成员并命名为LY-49Q。 LY-49Q在细胞内区域具有ITIM基序，表明它充当抑制受体。由于半定量PCR分析，LY-49Q mRNA逐渐逐渐降低，其表达水平在成熟的NK细胞中极低。这是一种独特的动态，与出生后开始表达的已知LY-49分子不同。这表明LY-49Q可能在胎儿肝脏中NK细胞的分化或妊娠期间的母体和儿童相互作用中起作用。目前，为了进行功能分析，我们正在创建特定的单克隆抗体和识别分子的鉴定。（2）对小鼠CD94的表达和功能分析：分析了抗体Yuri3的性能，该抗体YURI3对NK和NKT细胞有专门反应并修饰NK细胞的细胞毒性活性，以识别识别分子。结果表明，YURI3抗体识别小鼠CD94。 CD94在NK，NKT细胞和某些CD8阳性T细胞中表达，成熟的NK细胞分为两个群体：CD94-strong和CD94细胞阳性细胞。在MHC I类缺乏的小鼠中，CD94阳性细胞级分的增加表明CD94可能受MHC I类分子的调节。使用基因转移产生的转染物的分析表明，小鼠CD94单独在细胞表面和与NKG2的复合物中表达，并且YURI3抗体可以识别两者。在存在YURI3抗体的情况下，针对同种异体和同种异体衍生的靶细胞增强了NK细胞的细胞毒性活性。这表明，CD94可以通过构成复合物的NKG2的类型来传输激活和抑制信号，目前正在进行信号转导途径的分析。