NK細胞の標的認識に関わる新規細胞表面分子の同定とその機能解析

参与NK细胞靶标识别的新型细胞表面分子的鉴定及其功能分析

• 批准号: 11140285
• 负责人: 反町 典子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11140285/
• 关键词: NK細胞; NKレセプター; CD94; モノクローナル抗体; 抑制性レセプター; Ly-49; 遺伝子クローニング

NK細胞は抗原の感作なしに腫瘍細胞やウイルス感染細胞を殺傷することのできるリンパ球集団で、免疫監視機能に重要な役割を果たしていると考えられている。本研究では、NK細胞の標的認識に関与する新規レセプター群の同定を目的として研究を行った。(1)NK細胞分化の初期に選択的に発現する新規Ly-49の遺伝子クローニングとその性状解析:胎児肝臓内NK細胞におけるNKレセプターの発現を解析する過程で、胎児肝細胞内NK細胞にLy-49様分子が発現することを見いだした。この分子の性状およびNK細胞における機能を明らかにするために、胎児肝NK細胞に発現するLy-49分子群の遺伝子クローニングを試みた。その結果、Ly-49ファミリーに属する新規メンバーを同定し、Ly-49Qと命名した。Ly-49Qは細胞内領域にITIMモチーフを有することから、抑制性レセプターとして機能することが示唆された。半定量的PCR解析の結果、Ly-49QのmRNAは出生までに次第に減少し、成熟NK細胞においてはその発現量は極めて少なくなる。これは、生後に発現が始まる既知のLy-49分子とは異なるユニークな動態である。このことから、Ly-49Qは胎児肝臓内でのNK細胞の分化あるいは妊娠期間中の母子相互作用に何らかの役割を果たしている可能性が考えられる。現在その機能解析のために、特異的モノクローナル抗体の作成、認識分子の同定を進めている。(2)マウスCD94の発現と機能解析:NKおよびNKT細胞に特異的に反応し、NK細胞の細胞障害活性を修飾する抗体Yuri3の性状解析を行い、認識分子を同定した。その結果、Yuri3抗体はマウスCD94を認識することが明らかになった。CD94は、NK、NKT細胞および一部のCD8陽性T細胞に発現し、成熟NK細胞はCD94強陽性細胞とCD94弱陽性細胞の2集団に分類された。MHCクラスI欠損マウスにおいてはCD94強陽性細胞分画が増加することから、CD94がMHCクラスI分子によって発現調節を受ける可能性が示唆された。遺伝子導入によって作成したトランスフェクタントを用いた解析から、マウスCD94は単独およびNKG2との複合体としても細胞表面に発現し、Yuri3抗体はその両者を認識しうることが明らかとなった。Yuri3抗体存在下では、syngeneicおよびallogeneic由来の標的細胞いずれに対してもNK細胞の細胞障害活性を増強した。このことから、複合体を形成するNKG2の種類によって、CD94は活性化シグナルと抑制性シグナルのいずれもが伝達される可能性は示唆され、現在シグナル伝達経路の解析も進めている。

NK cells は antigen の feeling as な し に swollen sores cells や ウ イ ル ス infected cells を す る こ と の で き る リ ン パ ball set 団 で, immune surveillance function に important な "を cut fruit た し て い る と exam え ら れ て い る. This study で は, NK cells の mark know に masato and す る new rules レ セ プ タ ー group の be を purpose と し を line っ て research た. (1) early の に NK cells differentiation of sentaku に 発 now す る new rules on Ly - 49 の posthumous son 伝 ク ロ ー ニ ン グ と そ の characters and parsing: tire where NK cells within a routine liver に お け る NK レ セ プ タ ー の 発 now を parsing す で る process, where NK cells within the liver cell に Ly - 49 others in molecular が 発 now す る こ と を see い だ し た. こ の molecular の traits お よ び NK cells に お け る function を Ming ら か に す る た め に, tire where hepatic NK cells に 発 now す る Ly - molecular group of 49 の heritage 伝 son ク ロ ー ニ ン グ を try み た. そ の results, Ly - 49 フ ァ ミ リ ー に genus す る new rules メ ン バ ー を with し, Ly - 49 q と named し た. Ly - 49 q は intracellular domain に ITIM モ チ ー フ を have す る こ と か ら, inhibitory レ セ プ タ ー と し て function す る こ と が in stopping さ れ た. Semi-quantitative PCR analytic の results, Ly - 49 q の mRNA は born ま で に initial に に し, mature NK cells お い て は そ の 発 now quantity は extremely め て less な く な る. <s:1> れ である, after birth に occurs が then まる it is known that the <s:1> Ly-49 molecule と である is different from なるユニ <s:1> <s:1> な な な な な な な である dynamic である. こ の こ と か ら, Ly - 49 q は tire where within a routine liver で の NK cells の あ る い は の mother-child interactions in pregnancy に what ら か の "を cut fruit た し て い る possibility が exam え ら れ る. Now, the functional analysis of そ and <s:1>, ために, the production of specific モノ and ロ and ナ, ナ, and the determination of molecular <s:1> are を in めて and る. (2) マ ウ ス CD94 の 発 now と function resolution: NK お よ び NKT cells に specific に anti 応 し, NK cells の handicap of active を modified す る antibody Yuri3 line analytical を い の traits, with known molecular を し た. Youdaoplaceholder0 そ results, Yuri3 antibody ウス ウスCD94を recognition する になった とが とが light ら する になった になった. CD94 に, NK, NKT cells および a part of <s:1> CD8 positive T cells に present at に, mature NK cells CD94 strongly positive cells とCD94 weakly positive cells <s:1> 2 groups に classification された. MHC ク ラ ス I owe loss マ ウ ス に お い て は CD94 points draw が raised with strong positive cells す る こ と か ら, CD94 が MHC ク ラ ス I molecules に よ っ て 発 now adjust を by け が る possibility in stopping さ れ た. Heritage 伝 son import に よ っ て made し た ト ラ ン ス フ ェ ク タ ン ト を with い た parsing か ら, マ ウ ス CD94 は 単 alone お よ び NKG2 と の complex と し て も cell surface に 発 し, Yuri3 antibody は そ の struck the を know し う る こ と が Ming ら か と な っ た. In the presence of Yuri3 antibody, で および and syngeneicおよびallogeneic are used to enhance the <s:1> cytotoxic activity を of the target cells against <s:1> て <e:1> NK cells and <s:1> た た. こ の こ と か ら, complex を formation す る NKG2 の kinds に よ っ て, CD94 は activeness シ グ ナ ル と inhibitory シ グ ナ ル の い ず れ も が 伝 da さ れ は る possibility in stopping さ れ, now シ グ ナ ル 伝 da 経 road の parsing も into め て い る.

项目成果

Yamaguchi, M.: "The effect of flow on the neutrophil-mediated Ca2+ responses in human vascular endothelial cells stimulated by endotoxin"Surgery Today. 29. 966-969 (1999)

Yamaguchi, M.：“流量对内毒素刺激的人血管内皮细胞中中性粒细胞介导的 Ca2 反应的影响”《今日外科》。

Endo, J.: "Deficiency of a STE20/PAK family kinase LOK leads to the acceleration of LFA-1 clustering and cell adhesion of activated lymphocytes"FEBS letter.

Endo, J.：“STE20/PAK 家族激酶 LOK 的缺陷导致 LFA-1 聚集和活化淋巴细胞的细胞粘附加速”FEBS 信函。

Ishiwatari-Hayasaka, H.: "Requirements for signal delivery through CD44 ; analysis using CD44-Fas chimeric proteins"Journal of Immunology. 163. 1258-1264 (1999)

Ishiwatari-Hayasaka, H.：“通过 CD44 传递信号的要求；使用 CD44-Fas 嵌合蛋白进行分析”免疫学杂志。