抑制と活性シグナルを導入する多型性リンパ球受容体群の認識分子の同定

鉴定识别引入抑制和激活信号的多态性淋巴细胞受体的分子

• 批准号: 11770166
• 负责人: 小野 栄夫
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-11770166/
• 关键词: 免疫; 受容体; リンパ球; リガンド; 合成タンパク質; 遺伝子発現

免疫・炎症性細胞の中で,B細胞,骨髄球系細胞,マスト細胞に発現する新規膜表面受容体分子PIRのリガンド分子の同定を目的とした研究を,12年度研究計画に則り行った.その成果を以下2項にまとめる.1.PIRのポリマータンパクの発現細胞の選定とタンパク精製11年度の結果から,当初計画された293T細胞やCOS細胞を用いた一過性発現系では,PIRポリマーが細胞内に貯留し,分泌タンパクとしては回収・精製不能と判断された.12年度の研究では,ミエローマ細胞での安定発現系によるPIRポリマーの発現を実施し,分泌タンパクとして回収・精製されるかを検討した.その結果,一過性発現系の場合と同様に,PIRポリマーは細胞内に発現するものの分泌はされなかった.次に我々は,293T細胞を用いた一過性発現系に戻り,細胞分画よりPIRポリマーの精製を試みた,PIRポリマーcDNA構築を293Tに導入し,該タンパクの発現を確認後,細胞溶解液より抗FLAG抗体アガロースビーズで精製した.SDS-PAGE後の銀染色で,ほぼ単一バンドまでに精製されたPIRポリマーが得られたが,せいぜい10^8あたり1μg以下の回収率に止まった.2.PIRポリマーを用いた細胞染色1.で精製したPIRポリマーを用いて,マウス脾細胞の染色を行った.さらに,サイトカイン刺激後の脾細胞も同様の解析に供した.NK細胞マーカー,T細胞マーカーとPIRポリマーの組み合わせで,二重染色を施し,FACS解析装置によってPIRポリマーの結合を示す細胞種の同定を試みた.その結果,我々の精製したPIRポリマーに認識される細胞種は認められなかった.

The identification of PIR and PIR molecules in immune inflammatory cells,B cells, osteoblasts and osteoblasts was studied under the 12-year research plan. 1. The results of the 11-year study on the selection and purification of PIR and the transient detection system originally planned for use in 293T cells and COS cells are as follows: 1. The results of the 11-year study on the selection and purification of PIR and the purification of PIR and COS cells are as follows: The development of PIR in the stable development system of the cell is carried out, and the secretion of PIR is investigated. As a result, transient expression occurs in the same way,PIR occurs in cells and is secreted. In addition, 293T cells were used for transient development of the system, cell analysis, purification of PIR molecules, construction of PIR molecules cDNA, introduction of 293T, identification of the development of the molecule, cell lysis, purification of anti-FLAG antibodies, silver staining after SDS-PAGE, purification of PIR molecules, purification of anti-FLAG antibodies, purification of anti-FLAG antibodies. 2. PIR staining of spleen cells 1. Refined PIR staining of spleen cells In addition, the analysis of spleen cells after stimulation by FACS was performed.NK cells and T cells were analyzed by PIR staining. As a result, we refined the PIR and recognized the cell species.

项目成果

Nakamura,A.,Yuasa,T.,Ujike,A.,Ono,M.,Nukiwa,T.,Ravetch,J.V.,Takai,T.: "Fcγ receptor IIB-deficient mice develop Goodpasture's syndrome upon immunization with type IV collagen : A novel murine model for autoimmune glomerular basement membrane disease."Journ

Nakamura, A.、Yuasa, T.、Ujike, A.、Ono, M.、Nukiwa, T.、Ravetch, J.V.、Takai, T.：“Fcγ 受体 IIB 缺陷小鼠在使用 IV 型胶原蛋白免疫后会出现 Goodpasture 综合征：一种用于自身免疫性肾小球基底膜疾病的新型小鼠模型。”杂志

Yuasa,T.,Ono,M.,Watanabe,T.,and Takai,T.: "Lyn is essential for Fcγ receptor III-mediated systemic anaphylaxis but not for the Arthus reaction."Journal of Experimental Medicine. 193. 563-571 (2001)

Yuasa, T.、Ono, M.、Watanabe, T. 和 Takai, T.：“Lyn 对于 Fcγ 受体 III 介导的全身性过敏反应至关重要，但对于阿瑟斯反应则不然。”实验医学杂志 193. 563-。 571（2001）

Onah,D.N.,Uchiyama,F.,Nagakui,Y.,Ono,M.,Takai,T.,and Nawa,Y.: "Mucosal defense against gastrointestinal nematodes : responses of mucosal mast cells and mouse mast cell protease 1 during primary strongyloides venezuelensis infection in FcRγ-knockout mice."

Onah, D.N.、Uchiyama, F.、Nagakui, Y.、Ono, M.、Takai, T. 和 Nawa, Y.：“针对胃肠道线虫的粘膜防御：原发性粘膜肥大细胞和小鼠肥大细胞蛋白酶 1 的反应FcRγ 敲除小鼠体内委内瑞拉类圆线虫感染。"

Lee,K.H.,Ono,M.,Inui,M.,Yuasa,T.,and Takai,T.: "Stimulatory function of gp49A, a murine Ig-like receptor, in RBL-2H3 cells."Journal of Immunology. 165. 4970-4977 (2000)

Lee, K.H.、Ono, M.、Inui, M.、Yuasa, T. 和 Takai, T.：“gp49A（一种鼠类 Ig 样受体）在 RBL-2H3 细胞中的刺激功能。”免疫学杂志。