癌細胞運動とマトリックスメタロプロテアーゼ活性発現調節機構の解明

阐明癌细胞运动和基质金属蛋白酶活性表达的调控机制

• 批准号: 12770071
• 负责人: 滝野 隆久
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770071/
• 关键词: 細胞運動; MMP; 浸潤; PTEN; リン酸化

癌抑制遺伝子PTEN(phosphaatase aand tensin homologue deleted on chromosome10)は悪性腫瘍の悪制度と相関して変異・欠質が認められる。PTENの活性は細胞膜への移行およびPTENタンパクの安定性により制御されていると考えられる。このPTEN活性の制御にはそのカルボキシル末端が重要な役割を担っており、PTEN活性の制御機構を解明するためにPTENのカルボキシル末端をバイトにしてYeast Two-Hybrid法にてスクリーニングを行った。(結果)既知の4回膜貫通型分子とアクチン結合分子が同定された。培養細胞を用いた過剰発現系にて4回膜貫通型分子、アクチン結合分子とPTENの結合が免疫沈降法により確認された。この4回膜貫通型分子はC-末端の細胞内ドメインを介してPTENと結合することがわかった。また、アクチン結合分子はアクチン結合部位とは異なる部位でPTENと結合することがわかった。PTENのPI3-K/Akt経路抑制作用に対する4回膜貫通型分子ととアクチン結合分子の効果を抗リン酸化Akt抗体によるウエスタンプロッティングにて検討した。その結果、PTENによるAktのリン酸化抑制は4回膜貫通型分子と共発現することで増強された。(考察)インテグリン/FAK経路は細胞増殖、細胞分化、細胞運動を制御していおり、癌細胞浸潤機構解明の鍵であると考えられる。PTENはこのFAKの397番目チロシンを直接脱リン酸化することでFAKの活性を抑制し、PIP3を脱リン酸化することでも細胞運動を抑制する。最近、PTENのカルボキシル末端は膜への移行と安定性を制御していることが明らかになり、PTENのカルボキシル末端結合タンパクがPTENの活性を制御していると考えられる。今回PTEN結合分子として同定された4回膜貫通型分子はインテグリンと結合し細胞運動を制御していること、アクチン結合分子は細胞骨格形成に関与していることが報告されている。これらの経路にPTENがどの様に関与しているのか、FAKのリン酸化、MMPの活性発現に関与しているのかを今後検討する予定である。

Cancer suppressor 伝 sub-pten (phosphaatase aand tensin homologue deleted on chromosome10) 悪 悪 tumor <s:1> 悪 system と related <s:1> て variation · underquality が identification められる. PTEN <s:1> activity へ cell membrane へ migration およびPTENタ パ <e:1> <s:1> stability によ <s:1> control されて されて ると study えられる こ の PTEN activity の suppression に は そ の カ ル ボ キ シ ル end が cut を bear important な service っ て お り, PTEN activity の imperial institutions を interpret す る た め に PTEN の カ ル ボ キ シ ル end を バ イ ト に し て Yeast Two Hybrid method に て ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た. (Result) It is known that the <s:1> 4-cell membrane permeable molecule とア チ チ が binds to the molecule が された. Cultured cells を with い た through turning 発 now is に て transmembrane molecule, 4 back ア ク チ ン combined with molecular と PTEN の が immune sink method に よ り confirm さ れ た. The <s:1> <s:1> 4 membrane-penetrating molecules at the <s:1> c-terminal of the <s:1> cell ドメ を を を interconnects with the <s:1> てPTENと and bind to the する とがわ とがわ とがわ った った った った った った った った った った った った った った った った った った った った った った った った った った った った った. ま た, ア ク チ ン combining molecular は ア ク チ ン combining site と は different な る parts で PTEN と combining す る こ と が わ か っ た. PTEN の PI3 K/Akt inhibition に 経 road す seaborne る 4 back transmembrane molecule と と ア ク チ ン combining molecular の unseen fruit を resistance リ ン acidification Akt antibody に よ る ウ エ ス タ ン プ ロ ッ テ ィ ン グ に て beg し 検 た. The そ <s:1> results showed that PTENによるAkt <s:1> リ acidification inhibited <s:1> 4-cell membrane-penetrating molecules と, co-manifested する とで とで とで enhancement された. (inspection) イ ン テ グ リ ン / FAK (raised colonization 経 road は cells, cell differentiation, cell movement を suppression し て い お り, cancer cells infiltration agencies interpret の key で あ る と exam え ら れ る. PTEN は こ の FAK (の 397's mesh チ ロ シ ン を directly off リ ン acidification す る こ と で FAK (の inhibition し を, PIP3 を リ off ン acidification す る こ と で も cell movement を inhibit す る. Recently, PTEN の カ ル ボ キ シ ル end は membrane へ の transitional と stability を suppression し て い る こ と が Ming ら か に な り, PTEN の カ ル ボ キ シ ル end combining タ ン パ ク が PTEN の を active suppression し て い る と exam え ら れ る. Today back to PTEN combined with molecular と し て with fixed さ れ た 4 type back to transmembrane molecule は イ ン テ グ リ ン と combining し cell movement を suppression し て い る こ と, ア ク チ ン combining molecular は cells bone formation に masato and し て い る こ と が report さ れ て い る. こ れ ら の 経 road に PTEN が ど の others に masato and し て い る の か, FAK (の リ ン acidification, MMPS の activity 発 now に masato and し て い る の か を 検 for future す る designated で あ る.

项目成果

H.Miyamori: "Claudin promotes activation of pro-matrix metalloproteinase-2 mediated by membrane-type matrix metalloproteinases"J. Biol. Chem.. 276. 28204-28211 (2001)

H.Miyamori：“Claudin 促进膜型基质金属蛋白酶介导的前基质金属蛋白酶-2 的激活”J。

Y.Yoneruma: "Membrane-type 1 matrix metalloproteinase enhances lymph node metastasis of gastric cancer"Clin. Exp. Metastasis. 18. 321-327 (2000)

Y.Yoneruma：“膜1型基质金属蛋白酶增强胃癌淋巴结转移”Clin。

D.Kita: "Expression of dominant negative form of Ets-1 suppresses fibronectin-stimulated cell adhesion and migration through down-regulation of integrin α5 expression in U251 glioma cell line"Cancer Research. 61. 7985-7991 (2001)

D.Kita：“Ets-1 的显性失活形式的表达通过下调 U251 神经胶质瘤细胞系中整合素 α5 的表达来抑制纤连蛋白刺激的细胞粘附和迁移”癌症研究 61. 7985-7991 (2001)。

N.Nakada: "Suppression of membrane-type 1 matrix metalloproteinase (MMP)-mediated MMP-2 activation and tumor invasion by testican 3 and its splicing variant gene product, N-Tes"Cancer Research. 61. 8896-8902 (2001)

N.Nakada：“睾丸 3 及其剪接变异基因产物 N-Tes 抑制膜 1 型基质金属蛋白酶 (MMP) 介导的 MMP-2 激活和肿瘤侵袭”癌症研究。

H.Miyamori: "Human Membrane Type-2 Matrix Metalloproteinase is defective in cell-associated activation of progelatinase A."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 267. 796-800 (2000)

H.Miyamori：“人膜 2 型基质金属蛋白酶在原明胶酶 A 的细胞相关激活中存在缺陷。”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 267. 796-800 (2000)