アポトーシス細胞のクリアランス機構を応用した新規な遺伝子治療法の開発研究

利用凋亡细胞清除机制开发新型基因治疗方法的研究

• 批准号: 13877023
• 负责人: 鈴木 宏治
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877023/
• 关键词: Scramblase; Amino-phospholipid translocase; 遺伝子治療; 癌細胞; アポトーシス; 細胞膜リン脂質二重層; アデノウィルスベクター; アンチセンス法; 細胞膜; リン脂質; ホスファチジルセリン; 癌; カルシウム; 分子生物学

本研究は、癌細胞に細胞膜リン脂質局在化阻止酵素(Scramblase)遺伝子を導入することにより、あるいは、癌細胞における細胞膜リン脂質局在化酵素(Amino-phospholipid translocase : APLT)遺伝子の発現を阻止することにより、人為的に癌の細胞膜リン脂質二重層の外層のホスファチジルセリン、(phosphatidylserine : PS)の含量を高め、PS受容体を有するマクロファージ等の貪食細胞による癌細胞のクリアランス能を高めることを目指す新規な癌の遺伝子治療法の開発研究である。このため、過去2年間、研究に用いるヒトScramblase遺伝子及びAPLT遺伝子のクローニングを試みると共に、ヒトPS受容体の機能を明らかにするためその遺伝子クローニングを行ってきた。先ず、ヒト白血球cDNAライブラリーから既報のScramblase cDNA構造に基づいて作製したプライマーを用いたPCR法により複数のScramblase cDNA断片を増幅し、最終的に全長Scramblase cDNAを得た。このcDNAをアデノウィルスベクターに組込み、肝癌細胞由来HepG2細胞に導入し、Scramblse強制発現HepG2細胞をヒト血中のマクロファージと反応させ、マクロファージによる貪食率を対照細胞と比較した。しかし、これまでの処、Scramblase導入細胞と非導入細胞とでマクロファージの貪食能に有意差はみちれなかった。この理由には、(1)既報のScramblase遺伝子が真のScramblase機能を有する遺伝子ではない可能性、(2)クローニングしたScramblase cDNAのHepG2細胞への導入効率が悪く十分に機能を発現できない、(3)HepG2細胞で発現したScramblaseが機能を発現するには肝細胞固有の補助因子の必要性等が考えられた。今後、Scramblaseに対する抗体を作製し、細胞表面のScramblaseを定量する予定である。一方、APLT遺伝子のクローニングとその細胞導入ベクターの構築については現在進めているところであり、継続して実験を行う予定である。他方、マクロファージの細胞膜に存在するとされるPS受容体の遺伝子クローニングを行った結果、少なくとも3種類の遺伝子が同定され、現在、それらの機能を解析している。今後、研究成果を論文としてまとめて発表する予定である。

In this study, the lipid metabolism of cancer cells was inhibited by enzyme (Scramblase) Gene introduction into cancer cell membrane (Amino-phospholipid translocase : APLT) gene expression is prevented in human cancer cell membrane lipid double layer. The content of phosphatidylserine (PS) is high, and the PS receptor is high. It indicates that the development of new cancer gene therapy methods is necessary. In the past two years, the research on the function of PS receptor has been carried out in the field of Scramblase and APLT. The cDNA fragments of Scramblase were amplified by PCR and the full-length cDNA of Scramblase was obtained. This cDNA was introduced into HepG2 cells and was expressed in HepG2 cells under Scramblse stress. Scramblase introduced into cells and non-introduced into cells The reasons for this include: (1) the possibility of the Scramblase gene expression in HepG2 cells,(2) the efficiency of Scramblase gene expression in HepG2 cells, and (3) the necessity of the Scramblase gene expression in HepG2 cells. In the future, Scramblase antibody production and cell surface Scramblase quantification will be determined. A party, APLT gene is introduced into the cell, and the construction of the cell is carried out in a predetermined manner. The cell membrane of PS receptor was found to exist in different ways. The results showed that there were three kinds of genes in PS receptor. The function of PS receptor was analyzed. Future research results will be presented.

项目成果

Hori, H.: "Insulin resistance is associated with increased circulating level of thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor in type 2 diabetic patients"J. Clin. Endoc. Metabol.. 87. 660-665 (2002)

Hori, H.：“胰岛素抵抗与 2 型糖尿病患者中凝血酶激活的纤溶抑制剂循环水平升高有关”J.

鈴木 宏治(大内和雄 編集): "廣川タンパク質化学 第7巻 制御タンパク質-インヒビター"廣川書店 東京. 196 (2002)

铃木浩司（大内和夫编辑）：“广川蛋白质化学第 7 卷调节蛋白 - 抑制剂”广川书店东京 196（2002 年）。

Suzuki, K.: "Protein C inhibitor (PAI-3):structure and multi-function"Fibrinol. Proteol.. 14. 133-145 (2001)

Suzuki, K.：“蛋白 C 抑制剂 (PAI-3)：结构和多功能”纤维蛋白。

Shimizu, S., Suzuki, K., et al.: "The Natural anticoagulant activated protein C inhibits the expression of platelet-derived growth factor in the lung"Am. J. Respir. Crit. Care Med.. (In press). (2003)

Shimizu, S.、Suzuki, K. 等人：“天然抗凝剂活化蛋白 C 抑制肺中血小板衍生生长因子的表达”Am。

Tsuneyoshi, N.: "Expression and anricoagulant function of the endothelial cell protein C receptor (EPCR) in cancer cell lines"Thromb. Haemost.. 85. 356-361 (2001)

Tsuneyoshi, N.：“癌细胞系中内皮细胞蛋白 C 受体 (EPCR) 的表达和抗凝血功能”血栓。