強発癌性B型肝炎ウイルスの同定

高致癌性乙型肝炎病毒的鉴定

• 批准号: 13877071
• 负责人: 小池 和彦
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13877071/
• 关键词: 肝炎; B型肝炎ウイルス; HBx蛋白; 機能解析; CRE-loxP; Cre-loxP

HBVキャリアが全て肝癌を発生するわけでは無く、何らかの付加的な因子の解明が必要である。臨床的観点から診ると、HBV感染者における肝発癌スクリーニングの問題点は、C型肝炎の場合と異なり「肝癌発生の高危険群」の設定ができないことである。将来肝癌を発生しやすいウイルスが同定できれば、肝癌を早期に察知して早期に治療することが可能となる。この目的のため、発現スイッチ・オン・システムを用いた機能的解析によって強発癌性B型肝炎ウイルスを同定べく、発現ベクターを構築した。まず患者血清からDNAを抽出し、B型肝炎ウイルス(HBV)X遺伝子を含む遺伝子断片をPCR法で増幅した。次いで、制限酵素DraIとBglIIで、X遺伝子とそのエンハンサー、プロモーターおよびポリAシグナルを切り出した。これをプラスミドに入れ、その後AluIサイトに、ファージ由来のloxP配列2個の間にネオマイシン耐性遺伝子とポリA選択シグナルを挟みこんだ遺伝子断片lneolpを挿入した。これを完全な癌化細胞ではないRat-1あるいはL細胞に導入し、一連の細胞株を樹立した。一人の患者血清から得られたHBV-DNAクローンについて樹立された、それぞれ複数の細胞株を10%FCSを含むあるいは含まない培地中で培養し、細胞株の増殖速度、ploidy、コロニー形成能を検討した。細胞株毎に増殖能にはバラツキが見られたが、ひとつのHBV-DNAクローンWT-2は他のクローンに比して明らかな増殖亢進を、繰り返しもたらした。本クローンの塩基配列を解析中である。

HBV キ ャ リ ア が full て liver を 発 raw す る わ け で は く, what ら か の な factors plus の interpret が necessary で あ る. Clinical 観 point か ら diagnosis る と, HBV infection に お け る 発 liver carcinoma ス ク リ ー ニ ン グ の は problem point, hepatitis C の と different な り "発 の raw liver cancer high-risk 険 group" の set が で き な い こ と で あ る. Liver cancer in the future を 発 raw し や す い ウ イ ル ス が with fixed で き れ ば, liver を early に about し て early に treatment す る こ と が may と な る. こ の purpose の た め, 発 ス イ ッ チ · オ ン · シ ス テ ム を with い た function analytical に よ っ て strong 発 carcinoma hepatitis B ウ イ ル ス を with fixed べ く, 発 ベ ク タ ー を build し た. ま ず patients serum か ら を DNA extraction し, hepatitis B ウ イ ル ス (HBV) X heritage 伝 son を contain traces of む 伝 son fragment を PCR method of で raised し た. Time い で limitations, enzyme DraI と BglII で, X but 伝 と そ の エ ン ハ ン サ ー, プ ロ モ ー タ ー お よ び ポ リ A シ グ ナ ル を り cutting out し た. こ れ を プ ラ ス ミ ド に into れ, そ の after AluI サ イ ト に, フ ァ ー ジ origin の loxP arrangement between two の に ネ オ マ イ シ ン patience heritage 伝 son と ポ リ A sentaku シ グ ナ ル を carry み こ ん だ heritage 伝 son fragment lneolp を scions into し た. <s:1> れを complete な carcinogenic cells で な な <s:1> Rat-1ある <s:1> <s:1> L cells に were introduced into <s:1> and a continuous <s:1> cell line を was established to set up た. One の patients serum か ら have ら れ た HBV - DNA ク ロ ー ン に つ い て set さ れ た, そ れ ぞ れ plural の cell lines を 10% FCS を containing む あ る い は containing ま な い で し, cell lines in the petty の raised colonization rate, ploidy, コ ロ ニ ー can form を beg し 検 た. Cell lines in their に rights can yield に は バ ラ ツ キ が see ら れ た が, ひ と つ の HBV - DNA ク ロ ー ン WT - 2 は he の ク ロ ー ン に than し て Ming ら か hyperthyroidism を な raised colonization, Qiao り return し も た ら し た. In this analysis of the を ロ, the ロ, <s:1>, and the を of the <s:1> base arrangement, である.

项目成果

Perlemuter G., et al.: "Hepatitis C virus core protein inhibits microsomal triglyceride transfer protein activity and very low density lipoprotein secretion: a model of viral-related steatosis"FASEB J. 16. 185-194 (2002)

Perlemuter G.等人：“丙型肝炎病毒核心蛋白抑制微粒体甘油三酯转移蛋白活性和极低密度脂蛋白分泌：病毒相关脂肪变性的模型”FASEB J. 16. 185-194 (2002)

Fujie H, et al.: "Frequent β-catenin aberration in human hepatocellular carcinoma"Hepatol Res. 20. 39-51 (2001)

Fujie H 等人：“人肝细胞癌中常见的 β-连环蛋白畸变”Hepatol Res. 20. 39-51 (2001)

Koike K, et al.: "Role of hepatitis C virus in the development of hepatocellular carcinoma : Transgenic approach to viral hepatocarcinogenesis"J Gastroenterol Hepatol. 17. 394-400 (2002)

Koike K 等人：“丙型肝炎病毒在肝细胞癌发展中的作用：病毒性肝癌发生的转基因方法”J Gastroenterol Hepatol。

Moriya K, et al.: "Increase of carbon 18 mono-unsaturated fatty acids in the liver of hepatitis C : Analysis in transgenic mice and humans"Biophys Biochem Res Commun. 281. 1207-1212 (2001)

Moriya K 等人：“丙型肝炎肝脏中碳 18 单不饱和脂肪酸的增加：转基因小鼠和人类的分析”Biophys Biochem Res Commun。

Fujie H, et al.: "Hepatitis B virus genotypes and hepatocellular carcinoma in Japan"Gastroenterology. 120. 1564-1565 (2001)

Fujie H等人：“日本的乙型肝炎病毒基因型和肝细胞癌”胃肠病学。